羥自由基清除率檢測試劑盒(Fenton微板法)使用說明書
羥自由基清除率檢測試劑盒(Fenton微板法)
一、產品簡介：
在生命活動的代謝過程中不斷產生各種自由基，其中羥自由基·OH是體內最活躍的活性氧，可介導許多生理變化，羥自由基作用于體內蛋白質、核酸、脂類等生物分子，造成細胞結構和功能受損，進而導致體內代謝紊亂引起疾病，如引發不飽和脂肪酸發生脂質過氧化反應，并損傷膜結構和功能。羥自由基清除能力是樣品抗氧化能力的重要指標之一，在抗氧化類保健品和藥品研究中得到廣泛應用。
雅吉生物羥自由基清除率檢測試劑盒(Fenton微板法)又稱羥自由基清除能力檢測試劑盒或羥自由基檢測試劑盒，其檢測原理是H2O2/Fe2+ 通過 Fenton 反應產生羥自由基，并將Fe2+氧化為Fe3+，導致紅色的鄰二氮菲-Fe2+氧化為無色的鄰二氮菲-Fe3+，使鄰二氮菲-Fe2+在536nm處的最大吸收峰消失，可通過酶標儀測定530~540nm處吸光度的變化，據此可計算出羥自由基的含量變化，即可計算出樣品的羥自由基清除率或清除能力。該試劑盒主要用于植物組織、血清、血漿等樣本。該試劑盒僅用于科研領域，不宜用于臨床診斷或其他用途。
二、產品組成：
| 名稱規格 | 100T | 存儲 |
| 試劑(A): 鄰二氮菲溶液 | 15ml | 4℃ |
| 試劑(B): OH Assay buffer | 20ml | RT |
| 試劑(C): 亞鐵顯色液 | 10ml | 4℃ |
| 試劑(D): 氧化劑 | 10ml | 4℃ |
| 使用說明書 | 一份 | |
三、自備材料：
1、蒸餾水
2、實驗材料：植物組織(芹菜、綠豆、玉米等葉片)、血液、組織樣本等
3、研缽或勻漿器
4、離心機、離心管或試管
5、水浴鍋
6、酶標儀、96 孔板
四、操作步驟(僅供參考)：
1、準備樣品：
①植物樣品：取正常或逆境下的新鮮植物組織，清洗干凈，擦干，切碎，迅速稱取，按1~1.5g 樣品：4.5ml 蒸餾水的比例勻漿或研磨，室溫靜置 4h，3000g 離心 30min，上清液即為羥自由基粗提液，4℃保存備用。(亦可參考相關資料提取方法提取)
②血漿、血清和尿液樣品：血漿、血清按照常規方法制備后可以直接用于本試劑盒的測定，4℃保存，用于羥自由基的檢測。
③高活性樣品：如果樣品中含有較高濃度的羥自由基，可用蒸餾水進行恰當的稀釋。
2、·OH加樣：按照下表設置空白管、未損傷管、損傷管、對照管、測定管，溶液應按照順序依次加入，然后，置各管于 37℃水浴鍋保溫 1h。如果樣品中的羥自由基(·OH)濃度過高，可以減少樣品用量或適當稀釋后再進行測定，樣品的檢測最好能設置平行管。
| 加入物(ml) | 空白管 | 未損傷管 | 損傷管 | 對照管 | 測定管 |
| 鄰二氮菲溶液 | — | 0.15 | 0.15 | — | 0.15 |
| OH Assay buffer | 0.2 | 0.2 | 0.2 | 0.2 | 0.2 |
| 亞鐵顯色液 | — | 0.1 | 0.1 | — | 0.1 |
| 蒸餾水 | 0.8 | 0.55 | 0.45 | 0.7 | 0.35 |
| 待測樣品 | — | — | — | 0.1 | 0.1 |
| 氧化劑 | — | — | 0.1 | — | 0.1 |
3、·OH 測定：取96孔板，將各管溶液依次吸取300ul加至96孔板中，用酶標儀檢測530~540nm處各孔吸光度值，依次記為A0、A1、A2、A3`、A3。
五、計算：
組織樣品·OH 清除率(%)=[(A3- A3`)-( A2- A0)]/[ (A1- A0)-( A2- A0)]×100
=[(A3- A3`)-( A2- A0)]/(A1-A2)×100
備注：A0=空白管的吸光度值
A1=未損傷管的吸光度值
A2=損傷管的吸光度值
A3`=對照管的吸光度值
A3=測定管的吸光度值
六、注意事項：
1、 實驗材料應盡量新鮮，如取材后不能立即檢測，應存于 4℃。
2、 測定過程中的干擾因素較多，容易對測定的準確性和靈敏度造成影響。
3、 水浴的溫度和時間應一致。
4、 如果沒有分光光度計，也可以使用普通的酶標儀測定，但應考慮酶標儀的最大檢測體積。
5、 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
七、有效期：6 個月有效。4℃運輸，4℃保存。
