圖1  各種免疫細胞或免疫組分在腫瘤免疫應答中的作用機制

因此，在體外建立ICK模型至關重要。目前有多種傳統技術可用于評估ICK，如流式細胞儀和各種生化讀數等，然而，這些工具對洞察細胞間的動態相互作用仍然有限：

1. 采用耗時的“終點式”檢測，每次檢測只能獲取一個時間點的結果；

2. 需要多次清洗，需要利用輻射性物質（如51Cr釋放實驗）或抗體標記（如流式細胞分析）進行定量分析；

3. 需要將多個時間點的不同樣本（孔）數據關聯在一起，以生成時程曲線，從而可能導致人為因素誤差；

4. 檢測時缺少環境控制而導致細胞變化，從而可能出現不需要或誤導性的實驗結果。
    

• 細胞毒性T細胞殺傷
• 抗體依賴的細胞介導的細胞毒作用（ADCC）
• 在腫瘤球模型中的免疫細胞殺傷

圖2  采用Incucyte®活細胞分析系統分別檢測免疫細胞對貼壁腫瘤細胞（SKOV-3，左圖）、懸浮腫瘤細胞（WIL-NS，中圖）和A549腫瘤球的殺傷作用（右圖）。
 

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Incucyte®免疫細胞殺傷試驗的主要優勢
1. 實時查看免疫細胞和腫瘤細胞之間的相互作用及殺傷過程，并進行全自動化的分析

• 觀察并量化免疫細胞與腫瘤細胞之間的動態相互作用
• 揭示細胞之間的相互作用，從而深入了解細胞亞群之間的免疫突觸
• 使用非干擾試劑測量腫瘤細胞的死亡和對腫瘤細胞增殖的抑制作用

 

圖3  利用Incucyte®免疫細胞殺傷試驗查看免疫細胞/腫瘤細胞相互作用。(1)細胞毒性T細胞和紅色熒光標記的腫瘤細胞之間的相互接觸。T細胞分裂。(2)腫瘤細胞受到細胞毒性T細胞的攻擊：“死亡之吻”。(3) 追蹤腫瘤細胞凋亡（caspase 3/7綠色熒光標記）、核固縮和細胞死亡。(4)腫瘤細胞分裂。
 

 

圖4  使用Incucyte® FabFluor-488試劑，在共培養體系中查看和量化免疫細胞與腫瘤細胞之間的作用。A549腫瘤細胞（CytoLight Red熒光試劑標記）與預激活或未激活的PBMC共培養，加入Incucyte® FabFluor-488-α-CD45和Incucyte® Opti-Green試劑來標記淋巴細胞。加入PBMC 2小時后拍照顯示CD45+細胞（綠色）和A549細胞（紅色）之間的作用。相互作用（overlay，圖示黃色mask）定量分析顯示活化效應細胞與靶細胞的相互作用顯著增加（結果見柱狀圖）。這一分析采用Incucyte® Cell-By-Cell 軟件完成。

2. 直接測量腫瘤細胞死亡和活性

• 使用直觀的Incucyte®圖像分析工具有選擇地量化腫瘤細胞增殖和凋亡。

• 使用Incucyte® Caspase 3/7凋亡試劑檢測腫瘤細胞凋亡，使用Incucyte® NucLight慢病毒試劑檢測腫瘤細胞增殖。

• 在細胞培養箱中全程監控腫瘤細胞的殺傷過程�？捎糜陂L期研究(>5天)。

SK-OV-3細胞+未激活人PBMC


SK-OV-3細胞+預先激活的人PBMC
 

   

圖5  用Incucyte®活細胞分析系統查看并量化ADCC效應。

 

3. 有多種靈活的共培養體系和方案供選擇

• 針對PBMC、細胞毒性T細胞(CD8+)和NK細胞與貼壁或懸浮腫瘤細胞共同培養的細胞免疫細胞殺傷方案

• 在T細胞介導的細胞毒性和抗體依賴的細胞介導的細胞毒性（ADCC）試驗中靈活選擇效應細胞和靶細胞

• 可采用3D腫瘤球模型，對免疫細胞殺傷進行實時查看和量化

 

圖6  將PBMC與SKOV-3（HER2陽性）或A549（HER2陰性）腫瘤細胞共培養，其中腫瘤細胞預先用NucLight Red熒光試劑標記。(A) 曲妥珠單抗誘導SKOV3腫瘤細胞增殖呈濃度依賴性抑制效應，(B) A549細胞未觀察到抑制作用。(C) 曲妥珠單抗抑制SKOV-3細胞增殖的濃度反應曲線。(D) 對照組和曲妥昔單抗組在72小時的代表性圖像。上一排是原始圖像，下一排是mask圖。

4. 即混即讀的96/384孔板方案，可用于高通量篩選

• 無需清洗，無需取出細胞，無放射性，無需抗體標記

• 設置完實驗即可走開，完全自動化的圖像捕獲和定量分析

• 兼容流式細胞術和終點式生化測量——當檢測完成時，采集細胞/上清液可用于下游試驗
   

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