概述

苯二氮卓類(BZ)是精神活性藥物，廣泛用于治療焦慮、失眠、煩躁、癲癇、肌肉痙攣和酒精戒斷。BZ短期使用被認為是安全有效的。然而，頻繁使用這些藥物可能導致依賴和濫用。由于這一特性，臨床、法醫和毒理學實驗室對監測生物樣品中的這些化合物很感興趣。生物樣品常用的樣品制備方法包括：先將蛋白質沉淀，然后是液-液萃取(LLE)或固相萃取(SPE)。本應用介紹了一種簡便、快速、有效的全血苯二氮卓類藥物定量分析方法。

用含0.4%甲酸(FA)的2ml乙腈(MeCN)提取1mL陰性全血。采用400mg硫酸鎂(MgSO4)和100mg醋酸鈉(NaOAc)(預裝在15 ml離心管中)使相分離加強，并將苯二氮雜卓分離至有機相中。搖勻離心后，用含150mg MgSO4，50mg PSA， 50mg C18的2ml dSPE管純化，取1 mL上清液。MgSO4可除去萃取物中殘余的水，PSA和C18去除有機酸和脂肪基質共萃取物。得到一個純凈的提取物，用于LC-MS/MS分析。

建立苯二氮卓類化合物的基質匹配的校準曲線。10個基質匹配溶液濃度在10 ~ 500 ng/mL范圍內均呈線性關系，R范圍為0.9963 ~ 1.0000。通過比較同基質校準曲線與標準溶液的校準曲線的斜率來評價基質效應。基質效應很小，從-22%到18%不等。這表明帶有dSPE清除的QuEChERS方法可以充分去除基質干擾，這些干擾可能導致離子的顯著抑制或增強。加樣回收率為85.5 ~ 105%，相對標準偏差(RSD%)為10.7%。該方法也應用于8份真實全血樣本，未檢出苯二氮卓類藥物超過10 ng/mL的定量限。

過程

 QuEChERS提取   

a)將2 mL含0.4% FA的MeCN加入15 mL含400mg MgS04和100mg NaOAc的離心管中(ECQUUS15CT)

b)在強化樣品中加入內標(IS)和適量苯并加釘溶液

c)將1 mL陰性全血加入15 mL試管中

d)使用SPEX 2010 高通量組織研磨儀以1000次/分鐘的速率混勻1分鐘。

e) 3000g離心5分鐘

 dSPE清理  

a)將1ml上清轉移到2ml dSPE管(CUMPSC18CT)中。

b)使用SPEX 2010 高通量組織研磨儀以1000次/分鐘的速率混勻1分鐘

c) 300g離心5分鐘。

d)將0.4 mL清洗后的提取物轉移到一個2ml的自動取樣器小瓶中，加入0.4 mL試劑水，渦旋30秒

e)樣品已準備好進行LC-MS/MS分析。

 LC-MS/MS方法  

結果

Linearity and Matrix Effect

全血回收率和RSD%在3個水平上均有升高

加入200ng/mL苯二氮卓的全血色譜圖

7-氨基氯硝西泮的基質匹配校準曲線(R2=0.9998)

超高通量：一次可處理576個樣品或16個50mL樣品瓶

超高效率：垂直振蕩專利技術，1-2min完成困難樣品研磨、均質

高均一性：批量處理樣品，程序化處理機制，均一性、重復性更好

更人性化：可調角度彩色觸摸顯示屏，可編輯、調用、存儲500種方法

適用性廣：程序可調，更多研磨瓶、研磨介質可供選擇，完美契合不同樣品研磨、混勻需求

安全可靠：雙重門鎖，研磨過程更安全；設置保密程序，限制查看特定方法

低溫研磨：專業Kryo-Tech低溫組件及可調循環程序，維持研磨全過程低溫，適合溫度敏感型樣品