比黃金貴的蛋白，快到碗里來！

最近一則關(guān)于也門的漁民撿到一塊127公斤龍涎香，賣出后售價(jià)高達(dá)960萬的新聞?lì)l上熱搜。當(dāng)大家紛紛驚嘆龍涎香的價(jià)格堪比黃金的時(shí)候，其實(shí)，在生物界還有一種遠(yuǎn)遠(yuǎn)比黃金貴的多的東西，那就是生物研究中不可或缺的蛋白。比如科研用的很多蛋白售價(jià)動(dòng)輒幾千1g是非常常見的，當(dāng)然也有上萬的，可以說比龍涎香或是黃金貴的多了。
 
那為什么蛋白那么貴呢？因?yàn)榈鞍椎漠a(chǎn)量是非常低的，尤其是哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)得到的蛋白，一般濃度都是極低的。那么，這么珍貴的蛋白，如何能做到盡量的不浪費(fèi)呢？比如在細(xì)胞澄清后進(jìn)行濃縮和換液的步驟，都會(huì)涉及超濾的步驟，而小伙伴們肯定最擔(dān)心的就是是否有膜上殘留導(dǎo)致浪費(fèi)蛋白的問題，那么如何提高蛋白的回收率呢？今天，小賽就從如下幾個(gè)方面談?wù)勱P(guān)于蛋白回收的問題。
   
   
不同的膜材質(zhì)（再生纖維素RC， 聚醚砜PES，三醋酸纖維素CTA，Hydrosart膜）會(huì)對樣品的回收率產(chǎn)生影響，并不是一種膜可以適合所有的樣品。因?yàn)榈鞍讟悠肥且粋�(gè)復(fù)雜的體系，在這個(gè)體系中每個(gè)因素或是多個(gè)因素同時(shí)變化都會(huì)影響到蛋白的回收率。而不同的膜材質(zhì)也有不同的結(jié)構(gòu)，帶電性和疏水基團(tuán)等影響膜吸附的因素。所以，并不是一種膜孔徑的所有膜材質(zhì)吸附效果都是一樣的。因此如果你的pH和鹽條件、溫度、分子特性等發(fā)生變化，就需要重新確認(rèn)哪種膜才是最適合你的新樣品。
   
  關(guān)于超濾孔徑的選擇，很多小伙伴都知道需要1/3法則。即選擇目標(biāo)蛋白1/3的膜孔徑的超濾產(chǎn)品。但是，現(xiàn)實(shí)生活中，我們的蛋白性質(zhì)往往并不是理想的球形，同時(shí)也有不同的緩沖液影響，所以，有的時(shí)候，需要選擇比1/3還要小的孔徑才能做到盡量多的回收。

小伙伴們，如果你發(fā)現(xiàn)你的蛋白經(jīng)常回收率波動(dòng)大，或是漏蛋白，那可能要考慮是不是目前這個(gè)蛋白需要更小的膜孔徑才能得到穩(wěn)定的回收率。
    因?yàn)槌瑸V膜的表面是干燥的，同時(shí)，上面會(huì)有少量的甘油等作為保濕劑。所以，如果直接用來過濾樣品，膜上會(huì)吸附一點(diǎn)蛋白樣品。這個(gè)時(shí)候，就需要通過預(yù)處理（鈍化步驟）來減少蛋白的吸附。
 
鈍化步驟      
另外，在濃縮過程中，不均衡的蛋白質(zhì)、pH/樣品緩沖液條件以及高剪切應(yīng)力也會(huì)導(dǎo)致敏感蛋白降解產(chǎn)生，從而影響回收率。蛋白質(zhì)的形狀越呈線性，高離心力對結(jié)構(gòu)的不利影響就越大。如果蛋白質(zhì)呈線性、延長濃縮時(shí)間，降低離心力，則會(huì)顯著降低蛋白降解的可能。而對于更常見的球狀分子，建議使用最接近最小樣品量的裝置，這樣可確保更大的表面積、減少堵塞概率并會(huì)增加作用于樣品上的離心力。
 
 
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