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常見動物行為學實驗分組簡介及問題解答

瀏覽次數:5525 發布日期:2021-7-21  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負

動物實驗在大多數神經科學領域研究中均占有重要地位。主要原因在于:細胞分子水平發現的現象,轉換為動物整體研究,再轉換為臨床成果的三個階段均會有極大的失敗率。而且,細胞實驗上臨床檢測之前,也需要先有大量動物實驗。所以常規為了更好的促進研究向臨床研究轉化,采用動物實驗檢測相關研究的有效性是不可缺少的。而行為學是動物實驗中的重要組成板塊之一。

然而,動物行為實驗常見的難點有以下三大類:

  1. 實驗周期長。常規動物實驗包含繁殖期、適應期和實驗期,整體需要60-120天方可完成一組實驗,其成果產出的效率遠遠不如細胞和分子實驗;
  2. 影響因素復雜。動物作為一個整體,具有較強的自我恢復調控能力,直接導致分子細胞水平的有效干預手段,在行為實驗中失去了應有的作用;
  3. 實驗分組設計復雜。不同干預條件下,實驗分組區別較大。若實驗設計中分組不夠嚴謹,會直接導致實驗組與對照之間缺乏統計學差異。

第一類可以通過直接購買第三方廠家繁育動物得到一定緩解,若采用自繁育擴增基因鼠,則需要建立完善的實驗室與動物房。

第二類需要通過足夠的預實驗對干預手段進行驗證。

第三類,我們實驗人員需要通過廣泛文獻閱讀與深入思考總結規避該類難題。我們通過大量文獻閱讀及與行業專家溝通總結了常規分組方法如下:


01.手術造模行為學分組
手術造模一般分為自身對照與標準對照兩種方式。自身對照可分為前后對照,或者對側對照等。標準對照一般會將動物分成三組:正常組,模型組和假手術組(Sham組)。三組動物保證完全一樣的飼養條件。
  • 正常組未進行過手術造模。
  • 模型組指按實驗需求進行造模,如MCAO腦缺血造模,脊髓損傷造模等。
  • 假手術組指進行了手術但是沒有實質性損傷的動物,如MCAO腦缺血造模的假手術組即分離了頸動脈,但未進行結扎的動物,脊髓損傷的假手術組即剝離了動物椎板暴露出脊髓,但未對脊髓造成損傷的動物。
如MCAO腦缺血和脊髓損傷這種相對較復雜的手術造模,除了血管栓塞和脊髓損傷以外,分離頸動脈血管,剝離椎板這些操作實際上也對動物造成了一定的損傷。因此假手術組與正常組的實驗結果也會存在一定程度的差異。設立假手術組能幫助我們驗證手術操作是否引發實驗數據的差異。

02.動物給藥行為學實驗分組
拋開給藥方式從整體來看,一般會把動物分成四組,分別為空白對照組,給藥實驗組(可設置給藥濃度梯度),陽性給藥對照組和安慰劑(溶劑)組?瞻讓φ战M為不進行給藥的動物;給藥實驗組是驗證目的藥物藥效用,一般會設置3-5個濃度梯度驗證不同濃度藥物藥效;陽性給藥對照組主要作為實驗的陽性對照,以此判斷目的藥物的療效。一般采用藥物為目前行業公認的和目標藥物作用靶點相同或者治療癥狀相同的藥物進行給藥的組別,如MK-801、Ketamin等治療抑郁;安慰劑(溶劑組)則是使用生理鹽水或者目的藥物的溶劑進行給藥,作為實驗的陰性對照,判斷溶劑和給藥方式是否對動物有影響。

在實驗過程中,因為正常組無需進行給藥,一般會在安慰劑(溶劑)組動物出現與實驗預期不符的癥狀時,再使用同批次動物(實驗條件不允許時也可用相同來源同種動物代替)補充。當使用非常規溶劑進行藥物配制時(除純水,PBS,生理鹽水,葡萄糖以外的溶劑),均需要設置溶劑組,確認溶劑本身對動物沒有作用。

03.轉基因動物行為學檢測實驗分組
轉基因動物因其干預手段涉及因素更多,使得其研究分組更為復雜。下面我會以小鼠為例列出幾種情況來進行說明。

穩定遺傳的轉基因小鼠
很多轉基因小鼠品系穩定,已實現商業化。如5xFAD,Ptenflox等,可以在一些轉基因動物廠家購買到,并通過自行繁育進行擴群,僅需進行基因型鑒定即可實驗使用。這些動物通常會用來驗證藥物對已知動物疾病模型的作用。

一般分為四組:空白對照組,實驗組、陽性對照組、陰性對照組、轉基因背景鼠。轉基因背景鼠一般為同籠鑒定出的陰性鼠或者轉基因品系的背景鼠作為正常對照,和轉基因陽性鼠的正常組或安慰劑組以相同模式給藥,用于評估目的藥物的治療效果。

自行進行基因編輯動物
若自行在實驗室利用CRISPR或者Cre-LoxP等轉基因技術對小鼠進行基因敲除或者過表達,以進行某特定基因研究。一般會將動物分成3組:對照組,轉基因組,和回復組(根據實驗目的,在初期驗證轉基因性狀時無需設立,后續研究基因回復作用時需要設立)。

轉基因組指經過鑒定的轉基因陽性鼠;回復組指利用技術手段將轉基因敲除或過表達的基因回復到正常表達水平的鼠;而對照組則有很多個選擇的方向,如轉基因鼠的背景鼠,工具鼠的空載鼠(如搭載了空載的cre,cas9,FLP的鼠等),同籠的陰性鼠等。


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標簽: 行為學實驗
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