上一篇，陳老濕整理了2021年第一季度國內單位發表并引用Octet數據的文章。在這100多篇文章中，每篇文章都有獨到之處，創新滿滿。我們將從研究成果的意義、數據豐富程度、實驗設計方案、數據質量以及研究創意等幾個方面評選出各自的優勝者。
   
成都三葉草生物技術有限公司應用獨家trimer-tag專利技術，可以構建穩定的S蛋白三聚體（天然的S蛋白就是以三聚體形式存在，S-trimer）作為疫苗，并由GSK提供疫苗佐劑AS03和CpG 1018。該疫苗項目當前已經進入II期臨床試驗。與同是重組亞單位疫苗的NVX-CoV2373疫苗一樣，其產生的抗體滴度非常高。賽多利斯公司的Octet分子互作系統主要被用來檢測S trimer與受體ACE2的結合親和力，以及后續的疫苗QC放行。


將Fc-ACE2固化在proteinA傳感器上，然后和不同濃度的S-trimer進行結合解離，兩者的結合親和力約為1.33 nM。
 
目前市場上還有其他新冠疫苗也紛紛用到了Octet，詳情請看沒想到！BLI也是新冠疫苗研發的C位技術。


-參考文獻-
S-Trimer, a COVID-19 subunit vaccine candidate, induces protective immunity in nonhuman primates.JG Liang, D Su, TZ Song, Y Zeng, W Huang… - Nature …, 2021 - nature.com
 
   
有花植物通過感知多種環境和內部信號來誘導成花轉變，從而起始生殖生長周期。CO是一個光周期開花調控途徑的主要轉錄調控因子，其通過整合上游信號，激活成花基因FT的表達。
 
科研人員應用Octet互作實驗發現，CO通過CCT-NF-YB/YC結構域對于潛在CO在FT啟動子區的順式作用元件靶點CORE1、CORE2、P1、P2（DNA序列）具有相似的親和力。于是解析了CCT-NF-YB/YC和CORE2或者CORE1四元復合物結構，發現CO-NF-YB/YC 可以通過Arg331、Arg338、 Arg340及Arg344與核酸堿基之間形成氫鍵及電荷相互作用。然后又將這些氨基酸位點進行突變，通過Octet系統發現CCT-NF-YB/YC的親和力變弱。文中一共做了17對不同DNA和蛋白樣品的相互作用分析，斬獲當之無愧的“數據最豐富獎”。
   
將生物素化DNA固化在SA傳感器上，與蛋白復合物進行結合解離，以計算親和力。
  
-參考文獻-
Structural insights into the multivalent binding of the Arabidopsis FLOWERING LOCUS T promoter by the CO-NF-Y master transcription factor complex.Plant Cell. 2021 Jan 25
 
   
新冠病毒RNA所依賴的RNA聚合酶（RdRp）是理想的抗病毒靶點之一。中國醫學科學院的研究人員首先通過基于結構的虛擬篩選，篩選出15220個化合物。選擇結合最強的50個hits，通過Octet強大的高通量快速分析功能，鑒定了這些化合物與靶點SARS-CoV-2 RdRp的結合活性，并從中挑選結合活性較強的化合物進行體外和細胞學實驗分析。研究人員發現Corilagin (RAI-S-37)作為SARS-CoV-2 RdRp的非核苷抑制劑，可直接與RdRp結合，在細胞外和細胞活性檢測中均能有效抑制聚合酶活性，抑制SARS-CoV-2感染的EC50值為0.13 μmol/L)。Corilagin具有良好的安全性和藥代動力學的數據，使其成為新冠肺炎潛在的治療藥物。
 
從篩選到驗證，Octet高通量高靈敏的特點被發揮的淋漓盡致，妥妥的的“最佳實驗設計獎”。 Octet篩選與靶點蛋白結合的化合物，用NTA傳感器固化SARS-CoV-2 RdRp，與50個化合進行結合(50uM)，有16個化合物信號大于0.02nm。隨后的多濃度檢測進一步篩選出8個具有濃度依賴信號的化合物。
   在篩選出的8個化合物中，RAI-S-37與SARS-CoV-2 nsp12的親和力最高，達到0.54uM
  
-參考文獻-
Corilagin inhibits SARS-CoV-2 replication by targeting viral RNA-dependent RNA polymerase.Q Li, D Yi, X Lei, J Zhao, Y Zhang, X Cui, X Xiao… - … Pharmaceutica Sinica B, 2021
 
   
破傷風梭菌產生的破傷風神經毒素(TeNT)毒性極大，尤其是感染后潛伏期短、發病快，加劇患者的致命風險。開發和設計抗TeNT的中和抗體即是預防和治療的有效手段之一。
 
北京生物工程研究所的陳薇院士組從一名免疫了TeNT的C端結構域(TeNT- hc)的健康成人體內，分離了記憶B細胞，并鑒定了一系列單克隆抗體。其中13株抗體可與破傷風類毒素(TT)和TeNT-Hc結合，另兩株抗體則只識別TT。T3、T7和T9-6這三株抗體可以完全保護小鼠免受TeNT的感染，T2和T18則可顯著延長存活時間。這五個中和抗體識別不同的抗原表位。該研究提供了治療和預防破傷風神經毒素的有潛力的候選藥物。
 
信號濃度依賴性好，擬合完美，數據質量杠杠滴。 AHC傳感器固定不同的抗體結合TT，5株中和抗體均具有較強的結合，親和力KD在0.123 ~ 11.9 nM之間
 
-參考文獻-
Tetanus vaccine-induced human neutralizing antibodies provide full protection against neurotoxin challenge in mice.G Zhang, R Yu, X Chi, Z Chen, M Hao, P Du… - International …, 2021 - Elsevier
 
   
該項研究工作使用了三種不同大小的納米顆粒作為疫苗骨架，包括24聚體（Ferritin）、60聚體(mi3)和120聚體蛋白(I53-50)。利用SpyTag-SpyCatcher蛋白組裝體系形成的酰胺鍵，將RBD蛋白（新冠S蛋白受體結合區域）偶聯到這三種不同納米顆粒的表面。通過ELISA和Octet RED96檢測，與RBD單體相比，RBD偶聯的納米顆粒能夠顯著提高與受體ACE2以及中和性抗體CB6（一種可以阻斷RBD和ACE2結合的抗體）的親和力。并且隨著納米顆粒的粒徑增加，其結合能力隨之增強。小鼠免疫血清可以阻斷S蛋白和ACE2和CB6的結合，而且納米顆粒越大，競爭能力越強。直接拿免疫血清做阻斷實驗，充分表明Octet對于粗樣品的挑戰完全不在話下！ 小鼠免疫血清對S蛋白和ACE2和CB6的結合的阻斷實驗，RBD固化在SA傳感器，依次檢測免疫血清和ACE2或者CB6,然后計算ACE2或者CB6的高度。

-參考文獻-
Rapid development of SARS-CoV-2 spike protein receptor-binding domain self-assembled nanoparticle vaccine candidates.YF Kang, C Sun, Z Zhuang, RY Yuan, Q Zheng, JP Li… - ACS …, 2021 - ACS Publications