GEN eBook包含一系列文章和研究，重點關注創(chuàng)新的研究和開發(fā)策略，讓科學家們能夠充分利用新方法和獲得的新見解，解決病毒生物學的復雜問題，從而加快發(fā)現(xiàn)和開發(fā)抗病毒感染新疫苗的速度。
 
   
·  流感疫苗可預防患有鐮刀形細胞癥小鼠的H1N1感染
·  細胞系中的微粒釋放及其抗流感活性
·  接受腎透析的HIV陽性患者在接種水痘-帶狀皰疹病毒疫苗后的血清學和T細胞反應
·  使用新型多重T細胞活化試驗進行的激酶抑制劑表型篩選
·  對四價丙型肝炎病毒樣顆粒疫苗佐以Toll樣受體2型激動劑的抗體應答
自身免疫性疾病的一個主要原因是某些干擾導致TCR信號增強和T細胞過度激活。例如，一些遺傳缺陷、突變和其他機制導致T細胞激酶活性增強，從而參與許多自身免疫病的病理發(fā)生，使它們成為有吸引力的T細胞活化抑制劑靶點。
 
目前，F(xiàn)DA批準的激酶抑制劑（KI）有37種，主要用于腫瘤治療，此外約有250種正在臨床試驗中。專門針對T細胞激活早期信號事件的KI藥物，已成為治療自身免疫性疾病的新焦點，最近FDA已批準KI治療類風濕性關節(jié)炎。
 
在開發(fā)調節(jié)TCR活性的藥物和療法時，需要對細胞功能和健康進行分析。為了滿足快速監(jiān)測T細胞功能的需要，我們采用高通量流式細胞術開發(fā)了一種優(yōu)化的、高內涵的、多重性檢測方法來分析T細胞激活，可用于同時評估T細胞表型、T細胞激活標記物、細胞增殖、細胞活力及其分泌的細胞因子定量，并適用于96孔或384孔板的高通量篩選需求。
  采用這種方法快速篩選了152個KI小分子，以驗證其對人原代T細胞激活的抑制能力。樣本來自人外周血PBMC，采用抗CD3/CD28微球刺激。
  在基于流式細胞術的篩選中，我們將以下檢測在一次實驗中完成，節(jié)省時間，同時獲得豐富的樣本信息，以便做出綜合性決策：
 

• 檢測T細胞活化早、中、晚期的活化標志，分別是CD69、CD25和HLA-DR
• 評估CD4和CD8細胞的增殖水平
• 分析CD4和CD8細胞的活性
• 定量細胞分泌的多種細胞因子，以評估T細胞功能

 
我們將這些分析的指標作為小分子庫的篩選標準，用系統(tǒng)內置的篩選工具（Profile Map）進行篩選。
如下圖所示，左邊面板（圖A）顯示了篩選中整合的11個參數(shù)，及每個指標的用戶定義閾值。
 
通過這種篩選方法，我們鑒定出27種不同的KI，它們抑制所有的T細胞激活標記物及細胞因子分泌（如圖B所示）。
   圖C的折線圖對所有hits命中和抑制程度進行了排序，對每個指標提供了簡單的可視化呈現(xiàn)。例如，一些KI處理完全抑制所有激活標志，而其他化合物對某些特定的表型標志或細胞因子影響更大。
 
此外，本次實驗還用不同濃度的化合物（20uM - 20nM）處理細胞，以獲得抑制濃度曲線及IC50。這些數(shù)據(jù)顯示這些KI具有不同的MOA特性。
  這種基于流式細胞術的高通量篩選方法，既可用于抗體和小分子開發(fā)流程中的初篩，也可用于二次表型篩選。此外，T細胞活化和細胞因子檢測還可用于腫瘤免疫學領域的功能研究，對細胞制造過程中的T細胞進行表征。