建立具有簡便、可靠、重復性好、穩定性高的大腦中動脈遠端阻塞模型，有利于腦缺血病理生理學的研究，也可以利用該模型對各種預防、治療腦缺血的方法和藥物進行評價。本次介紹的大腦中動脈遠端阻塞模型是利用雙極電凝或者手術縫線將大鼠(或小鼠)的大腦中動脈主干進行電灼或結扎以阻斷其供血。該模型具有腦梗面積及部位重復性好、物存活率高、梗死體積相對較小等優點，能較好地模擬臨床卒中特點。

1.動物選擇

• 大鼠

可選擇封閉群大鼠，如SD、 Wistar等；也可選擇近交系大鼠，如ACI、BN、F344、WKY及SHR等。實驗常用SD、 Wistar和SHR大鼠。

• 小鼠

可選擇封閉群小鼠，如ICR、NIH、LACA、KM(昆明)小鼠等；也可選擇近交系小鼠，如C57BL/6J、DBA/2、BALB/c、中國1號(C-1)、津白1號(TA1)等。

2.制作步驟

• 大鼠手術操作步驟

l 大鼠稱重后放置在一個小籠內，在醫用級氧氣或者含有1%~2%異氟醚的30%氧氣和70%二氧化氮的混合氣體中進行誘導麻醉。

l 將左邊頭部毛發剔除，局部皮膚用0.5%聚烯吡酮黃和75%乙醇或者是2%氯己定（藍色溶液）消毒。

l 將大鼠移至手術臺或者手術墊，利用面罩，用醫用級氧氣或者含有1%-2%異氟醚的30%氧氣和70%二氧化氮的混合氣體進行吸入麻醉。然后將大鼠放置呈右側臥位，在左側眼外眥至外耳道之間做一長約2cm切口(見下圖)。

(a)大鼠右側臥位，四肢固定于手術臺；(b)箭頭示手術切口部位，直徑為2cm

l 顯露顳肌，可見顳神經、顳淺動脈、顳淺靜脈覆蓋在顳肌上；鈍性分離并牽開顳肌，注意避免損傷顳神經、顳淺動脈及顳淺靜脈，暴露顳骨；顯露顴弓，并用咬骨鉗去除大部分顴弓；顯露顳下窩，將下頜支及周圍肌肉牽開，以增加顯露的顱骨；可見下頜神經跨過顳下頜關節進入卵圓窩。

l 以卵圓窩或者下頜神經前方3cm、側方1cm的鱗骨上的點為中心，鉆一直徑為4~6mm的小孔，使該孔接近弓狀緣，細心將該孔鉆至深度0.5~1.0mm，鉆孔過程中感受顱骨的彈性和柔軟性，并經常用鹽水澆注，以試探是否將顱骨鉆透。在該小孔可見一淺溝斜線穿過并垂直向下進入顱骨基底部。

l 用23G針頭呈“十”字形劃開硬腦膜，可見大腦中動脈從顱底發出進入腦的頂部。大腦中動脈一般發出幾條分支，但這些分支的數目及位置存在個體差異。一條主要引流靜脈(大腦下靜脈)跨過大腦中動脈向前方走行。用Dumont彎鑷鉤住大腦中動脈并將其向上或向下牽離大腦下靜脈，然后用絲線(短暫性大腦中動脈阻塞)或者電凝器(永久性大腦中動脈阻塞)的方法將其阻斷(見下圖)。大腦中動脈的分支存在個體的解剖學變異，為了減少該卒中模型的差異，僅要求將其主干阻塞，未能分辨大腦中動脈主干的大鼠不能用于該模型的制作。如果在進行此區域手術操作過程中止血困難，可用1：1000腎上腺素澆注以輔助止血。

阻塞大腦中動脈

(a)絲線從大腦中動脈下端穿過并打結，黃色箭頭示大腦中動脈；

(b)絲線結扎大腦中動脈；

(c)清晰暴露大腦中動脈遠端（黃色箭頭所示血管）；

(d)電凝器電凝血管，白色箭頭示電凝后血管狀態;

l 將0.25%丁哌卡因(利多卡因、腎上腺素、丁卡因混合液)灑在切口上，以減少術后疼痛，縫合頭部傷口。

l 對于用絲線結扎大腦中動脈遠端制作的短暫性腦缺血模型，可以用小血管夾阻斷左側頸總動脈，60min后拿掉血管夾，造成再灌注。

l 在切口處噴灑0.1ml0.25%丁哌卡因，縫合頸部傷口。

l 在各個傷口處噴呋喃唑酮氣溶膠顆粒或其他抗生素防止傷口感染。

l 大鼠將在停止異氟醚吸入后10~20min內蘇醒。

• 小鼠手術操作步驟

操作步驟與大鼠模型相同，小鼠切口直徑為1cm（見下圖）。手術操作過程中注意顱骨骨瓣與大腦中動脈遠端主干的關系。

3.評估模型成功的指標

• 術中評估模型

可利用激光散斑血流成像系統對雙側大腦半球血流情況進行監測，若大腦中動脈遠端阻斷側血流量下降至對側或者術前血流的1/4~1/5，證明手術成功。否則，則大腦中動脈遠端主干結扎不完全或者結扎線不牢固。

• 術后評估模型

| 行為學評估

(1) Longa4分制評分法：不出現神經功能癥狀(分)，拎起尾巴時，左前爪不能伸直(1分)，向左側轉圈(2分)，向左側傾倒(3分)，沒有自主活動(4分)。

(2)轉角試驗：可同時評估運動和感覺功能。檢測裝置由連個垂直的木板組成，每塊木板長30cm，寬20cm，厚1cm，兩塊木板之間的夾角為30°。將實驗動物從兩塊木板形成夾角的開口處放入，動物進入夾角后會向左側或右側偏轉，身體站立，頭和身體最終轉向夾角開口方向。記錄實物動物向左側或右側偏轉，并完全依靠后肢站立并最終成功轉向夾角開口方向的次數。每只實驗動物共進行12次試驗。偏轉指數(LI)=(左側偏轉次數一右側偏轉次數)/總偏轉次數。

| 組織學評估

術后3d內，可進行TTC或H-E染色，觀察梗死區域是否位于大腦中動脈支配區域，梗死體積是否一致，有無過大或過小梗死。大腦中動脈遠端阻塞模型梗死部位一般局限于大腦皮質 (見下圖)。

(a)左側為TTC染色，白色區域為梗死部位；右側為H-E染色，黑色虛線部位為梗死部位。

(b)大腦中動脈遠端阻塞后3dTTC染色，*P<0.05

*以上內容部分源自《實驗卒中模型方法學》

書號：ISBN 978-7-313-21776-9

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