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多肽合成與修飾技術

瀏覽次數:2442 發布日期:2020-12-18  來源:南京肽業
實驗技術:多肽 合成是一個固相合成順序一般從C端(羧基端)向 N端(氨基端)合成。過去的多肽合成是在溶液中進行的稱為液相合成法。從1963年Merrifield發展成功了固相多肽合成方法以來,經過不斷的改進 和完善,到今天固相法已成為多肽和蛋白質合成中的一個常用技術,表現出了經典液相合成法無法比擬的優點,從而大大的減輕了每步產品提純的難度。多肽合成總的來說分成兩種:固相合成和液相多肽合成。

實驗技術原理:

多肽合成儀以固相合成為反應原理,在密閉的防爆玻璃反應器中使氨基酸按照已知順序(序列,一般從C端-羧基端 向 N端-氨基端)不斷添加、反應、合成,操作最終得到多肽載體。固相合成法,大大的減輕了每步產品提純的難度。為了防止副反應的發生,參加反應的氨基酸的側鏈都是保護的。羧基端是游離的,并且在反應之前必須活化。

實驗操作流程:

1、去保護:Fmoc保護的柱子和單體必須用一種堿性溶劑(piperidine)去除氨基的保護基團。
2、激活和交聯:下一個氨基酸的羧基被一種活化劑所活化。活化的單體與游離的氨基反應交聯,形成肽鍵。在此步驟使用大量的超濃度試劑驅使反應完成。循環:這兩步反應反復循環直到合成完成。
3、洗脫和脫保護:多肽從柱上洗脫下來,其保護基團被一種脫保護劑(TFA)洗脫和脫保護。

多肽修飾類型:

1、C端標記技術 :
C端酰胺化(Amidation,C-termainal)、醛基化(Aldehydes)、醇基化(Alcohols)、pNA (p-Nitroanilide)
AMC、AFC、巰基乙胺化(Cysteamide)、酯基化(Ester)、N-烷基化(N-Alkyl Amides)等

2、N端標記技術 :
乙酰化Acetylated (Acetylated)、Palmytolyl、HYNIC、生物素標記(Biotinylated)、Br乙酰化(Bromoacetylated)
螯合反應(DOTA,DTPA conjugated)、甲醛化(Formylated)、十四烷基、十八烷基化(Myristoylated)
琥珀酰化、棕櫚酸化、蘋果酸化、脂肪酸化等(Succinylated)

3、熒光標記修飾:
C端修飾:AFC, AMC, Dap(Dnp), Lys(Dye), pNA, Rh110
N端修飾:Biotin, Cy3, Cy5, Texas Red, 5-Tamra, 5-Fam,5-Fitc等
Rhodamine 110 and Rhodamine B Luciferin, EDANS
FAM, FITC, MCA, Rox, Sulforhodamine 101, 5-TAMRA

4、環化反應:
首尾成環,中間成環,特殊成環(N -> C or Head to Tail)
2對二硫鍵,3對二硫鍵(Disulfide (S-S bond formation) .Trisulfide formation)
天然產物活性肽成環(Cyclic-natural peptides )

5、甲基化修飾:
側鏈甲基化Lys(For),Lys(Me), Lys(Me)2, Lys(Me)3, Arg(Me)2 symmetrical, D-Tyr(Me),D-Tyr(Et)
N端甲基化(N-Me-Arg,N-Me-Asp, N-Me-Glu, N-Me-Leu, N-Me-Nle, N-Me-Nva, N-Me-Phe, N-Me-S N- Me-Ser, N-Me-Trp, N-Me-Thr, N-Me-Val)

6、幾種特殊修飾:
各 種偶聯(BSA, KLH conjugated peptides for antibody production )、磷酸化(Phosphoserine, Phosphothreonine, Phosphotyrosine)、磺化(Sulfated Tyrosine or Serine)、MAPS (Multiple Antigenic Peptide)、糖肽(Glycopeptides)、 PEG修飾(PEGylation)

實驗注意事項:
客戶提供:
1、多肽序列、數量、純度及特殊要求
2、凍干多肽可在-20度保存或室溫保存
3、溶液肽遠比凍干形式不穩定,溶液應為中性PH(5-7)-20度保存。
4、為避免樣品的反復凍融,最好分成小樣存放。
發布者:南京肽業生物科技公司
聯系電話:18061682550;18136875893
E-mail:sunny.xie@njpeptide.com

標簽: 多肽合成
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