氧化應激(Oxidative Stress,OS)是機體活性氧成分與抗氧化系統(tǒng)之間平衡失調(diào)引起的一系列適應性的反應。干擾細胞正常的氧化還原狀態(tài),會制造出過氧化物與自由基導致毒性作用,因此損害細胞的蛋白質(zhì)、脂類和核酸。脂質(zhì)過氧化導致不飽和脂質(zhì)的高反應性和不穩(wěn)定的氫過氧化物的形成。它們可以通過不穩(wěn)定的氫過氧化物的各種分解產(chǎn)物(例如烷烴,酮,醛)直接或間接評估。
丙二醛(MDA)是脂質(zhì)過氧化的天然產(chǎn)物。脂質(zhì)過氧化是植物和動物中細胞損傷的一種成熟機制,并被用作細胞和組織中氧化應激的指標。衍生自PUFAs的脂質(zhì)過氧化物不穩(wěn)定,分解形成一系列復雜的化合物,其中包括活性羰基化合物,例如MDA。在人類血小板中,血栓烷(TX)合酶還以1:1:1的比例催化前列腺素H2向TXA2、12(S)-HHTrE和MDA的轉(zhuǎn)化。
硫代巴比妥酸反應物(TBARS)的測定是一種篩選和監(jiān)測脂質(zhì)過氧化的成熟方法。許多研究人員對TBARS分析方法進行了改進,已用于評估幾種類型的樣本,包括人類和動物組織以及體液,藥物和食品。盡管在文獻中關(guān)于TBARS對MDA以外的化合物的特異性仍存在爭議,但它仍然是用于確定脂質(zhì)過氧化作用的最廣泛使用的測定方法。如果脂蛋白組分是從樣品中首先酸沉淀出來的,則將干擾的可溶性TBARS降至最低,并且該測試對脂質(zhì)過氧化反應具有非常高的特異性。具有更大不飽和度的脂質(zhì)將產(chǎn)生更高的TBARS值。建議如果獲得較高的TBARS值,應進行更具體的分析,如高效液相色譜法(HPLC)。
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TBARS(TCA方法)檢測試劑盒(貨號:700870)提供了一種簡單,可重復且標準化的檢測血漿,血清,尿液,組織勻漿和細胞裂解物中的脂質(zhì)過氧化的工具。由MDA和TBA在高溫(90-100°C)和酸性條件下反應形成的MDA-TBA加合物在530-540 nm處進行比色測定,在530 nm的激發(fā)波長和550 nm的發(fā)射波長下進行熒光測定(如下圖)。測定范圍為0.0625-50 µM。盡管用熒光法測量該反應的靈敏度要高得多,但是說明書中仍提供了兩種方法的protocol。(下載說明書,點我~點我~快點我)
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1.Zhang, Y., Tan, H., Daniels, J.D., et al.Imidazole ketone erastin induces ferroptosis and slows tumor growth in a mouse lymphoma model. Cell Chem. Biol. 26(5), 623-633 (2019).
2.Zadeh-Ardabili, P.M., Rad, S.K., Rad, S.K., et al. Palm vitamin E reduces locomotor dysfunction and morphological changes induced by spinal cord injury and protects against oxidative damage.Sci.Rep. 7(14365), (2017).
3.Mazereeuw, G., Herrmann, N., Andreazza, A.C., et al.Baseline oxidative stress is associated with memory changes in omega-3 fatty acid treated coronary artery disease patients. Cardiovasc.Psychiatry Neurol. 3674371, (2017).
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