JC-1細(xì)胞試劑盒的使用方法
最近很多客戶問我們的技術(shù)小姐姐，“JC-1 是買回來啦，我該怎么用啊？”“MCE 的 JC-1 有簡單易懂的 Protocol 嗎” 這不，您要的 Protocol 來啦，一看就會(huì)，一遍就能記住的那種！
前面我們介紹過 JC-1 的檢測(cè)原理（ JC-1/FITC，讓我們來個(gè)彩虹的約定！ ） ， JC-1 的試劑盒到手啦，但是該怎么操作呢？
規(guī)格：1T, 1 mL (100 萬細(xì)胞)
用途：早期細(xì)胞凋亡
檢測(cè)設(shè)備：熒光顯微鏡、激光共聚焦顯微鏡、熒光分光光度計(jì)或流式細(xì)胞儀
通道：FITC 通道看綠色，PI 通道看紅色
指示：紅綠熒光比例變化
a. 以 6 孔板為例，每孔加入 1mL 細(xì)胞培養(yǎng)液。
b. 陽性對(duì)照的設(shè)置：取適量 CCCP (50 mM) 恢復(fù)至室溫，陽性對(duì)照孔培養(yǎng)基中加入 1 μL，其終濃度為 50 μM，輕搖混勻，細(xì)胞培養(yǎng)箱 37℃ 孵育 5 分鐘。
c. 取適量 JC-1 (200 μM) 恢復(fù)至室溫，每孔培養(yǎng)基中加入 10 μL JC-1 (200 μM)，其終濃度為 2 μM，輕搖混勻，細(xì)胞培養(yǎng)箱 37℃ 孵育 15-20 分鐘。
e. 加入 500 μL 的 PBS (1×)，用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察 (綠色熒光：Ex/Em=510/527 nm，可用 FITC 通道；紅色熒光：Ex/Em=585/590 nm，可用 PE/PI 通道)。
是不是很簡單？動(dòng)動(dòng)手指，分享一下，再也不用擔(dān)心師弟師妹不會(huì)用 JC-1 啦！
參考文獻(xiàn)
前面我們介紹過 JC-1 的檢測(cè)原理（ JC-1/FITC，讓我們來個(gè)彩虹的約定！ ） ， JC-1 的試劑盒到手啦，但是該怎么操作呢？
MCE JC-1 Kit 資料 ● ●
規(guī)格：1T, 1 mL (100 萬細(xì)胞)
用途：早期細(xì)胞凋亡
檢測(cè)設(shè)備：熒光顯微鏡、激光共聚焦顯微鏡、熒光分光光度計(jì)或流式細(xì)胞儀
通道：FITC 通道看綠色，PI 通道看紅色
指示：紅綠熒光比例變化
■ 細(xì)胞染色
懸浮細(xì)胞和貼壁細(xì)胞的使用方法基本相同 (詳細(xì)說明戳 MCE 產(chǎn)品使用指南丨JC-1 使用指南)，我們以貼壁細(xì)胞為例：
注：若用熒光分光光度計(jì)或流式細(xì)胞儀檢測(cè)貼壁細(xì)胞，可先對(duì)貼壁細(xì)胞進(jìn)行消化、收集，重懸后參考懸浮細(xì)胞的檢測(cè)方法。若用熒光顯微鏡或共聚焦顯微鏡檢測(cè)，方法如下：
a. 以 6 孔板為例，每孔加入 1mL 細(xì)胞培養(yǎng)液。
b. 陽性對(duì)照的設(shè)置：取適量 CCCP (50 mM) 恢復(fù)至室溫，陽性對(duì)照孔培養(yǎng)基中加入 1 μL，其終濃度為 50 μM，輕搖混勻，細(xì)胞培養(yǎng)箱 37℃ 孵育 5 分鐘。
c. 取適量 JC-1 (200 μM) 恢復(fù)至室溫，每孔培養(yǎng)基中加入 10 μL JC-1 (200 μM)，其終濃度為 2 μM，輕搖混勻，細(xì)胞培養(yǎng)箱 37℃ 孵育 15-20 分鐘。
d. 37ºC 孵育結(jié)束后， 吸除上清，用 PBS (1×) 洗滌 2 次。
e. 加入 500 μL 的 PBS (1×)，用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察 (綠色熒光：Ex/Em=510/527 nm，可用 FITC 通道；紅色熒光：Ex/Em=585/590 nm，可用 PE/PI 通道)。
是不是很簡單？動(dòng)動(dòng)手指，分享一下，再也不用擔(dān)心師弟師妹不會(huì)用 JC-1 啦！
參考文獻(xiàn)
1. Fei Wang, et al. Urchin-like tungsten suboxide forphotoacoustic imaging-guided photothermal and photodynamic cancer combinationtherapy. New J Chem. 18 Oct 2017.
標(biāo)簽：
JC-1
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