徠卡101

組織脫水、透明、浸蠟、包埋

從患者到病理學(xué)家，準(zhǔn)備樣本進(jìn)行診斷需要細(xì)心、經(jīng)驗(yàn)以及合理的流程。

徠卡特地為大家整理了取材、組織脫水、透明、浸蠟、包埋以及染色等（常規(guī)、特殊、IHC以及FISH）101步操作流程，幫助大家更有效、更簡(jiǎn)單地獲得實(shí)驗(yàn)方案，避免錯(cuò)誤的發(fā)生。

 

步驟六十四

了解染色

🙆 正確：了解你正在做的染色。

🙅 錯(cuò)誤：只是“跟隨操作方法”，而不是真的知道染色結(jié)束需要觀察什么，可能會(huì)導(dǎo)致不夠好的染色結(jié)果。

A.PAs肝染色，正常情況下，脂褐素及糖原PA染色呈陽(yáng)性，膽汁和含鐵血黃素PAS染色呈陰性（分別為黃色和棕色）。

B.銀 Gomer i染色方法染肺部真菌（曲霉屬）感染。大多數(shù)城市居民和吸煙者肺中的一個(gè)共同特征，即真菌的菌絲在非染色情況下都是黑色的。

 

步驟六十五

使用陽(yáng)性對(duì)照

🙆 正確：總是使用陽(yáng)性對(duì)照片可以清晰的知道，是否包含想要展示的結(jié)構(gòu)/物質(zhì)。

🙅 錯(cuò)誤：如果我們?cè)诓Ｆ�中沒(méi)有看到想要顯示的結(jié)構(gòu)或物質(zhì)，我們認(rèn)為它是不存在的。

使用Perl’s方法證明肝硬化含鐵血黃素（藍(lán)色）包含鐵。這是一個(gè)較好的鐵陽(yáng)性對(duì)照染色。

 

步驟六十六

使用精確時(shí)間

🙆 正確：使用精確時(shí)間

🙅 錯(cuò)誤：時(shí)間總是大概。不精確的時(shí)間產(chǎn)生不一致的結(jié)果。

這兩張皮膚玻片來(lái)自同一塊蠟塊，同樣使用PAS染色。A玻片酸處理（氧化步驟）為5分鐘，而B玻片只有30秒（錯(cuò)誤）。結(jié)果B玻片基底膜染色效果很差。

 

步驟六十七

🙆正確：注意使用試劑的保質(zhì)期。部分試劑或染料溶液會(huì)漸漸改變，另一些試劑和染料溶液不穩(wěn)定，必須即配即用，還有的需要經(jīng)過(guò)一段時(shí)間的氧化（成熟）才可以使用。

🙅 錯(cuò)誤：我們假設(shè)所有的試劑都可用于不確定的周期。

Weigert’s 蘇木素由于過(guò)氧化呈現(xiàn)不干凈的染色效果，請(qǐng)注意膠原的棕色染色。

 

步驟六十八

正確儲(chǔ)存試劑

🙆 正確：正確儲(chǔ)存試劑。有些試劑需要冷藏，因?yàn)槿菀鬃躺�真菌或霉菌。有的光敏感試劑，需要在黑暗中�?chǔ)存。

🙅 錯(cuò)誤：“我們所有的試劑都儲(chǔ)存在染色平臺(tái)上的架子上。有時(shí)我們能在玻片上看到散在的其他有機(jī)物。”

使用長(zhǎng)了微生物的染色溶液（蘇木素）對(duì)玻片進(jìn)行染色，可見大量外來(lái)微生物覆蓋在組織切片頂部。

 

步驟六十九

遵守染色方法

🙆 正確：認(rèn)真完成程序的每一步。

🙅 錯(cuò)誤：當(dāng)使用相同的程序時(shí)，不同操作人員取得不同的染色結(jié)果。

福爾馬林固定的粘膜下層進(jìn)行馬松三色染色( Masson trichrome)。在正確執(zhí)行染色步驟時(shí)，包括第一步鉻酸染色（敏化或二媒染），A玻片呈現(xiàn)紅色的平滑肌。B玻片染色時(shí),這一步被跳過(guò)，B玻片中可見肌肉缺乏差異性著色（小腸）。

 

步驟七十

記錄所有更改

🙆 正確：記錄所有實(shí)驗(yàn)中偏離。

🙅 錯(cuò)誤：染色結(jié)果不好，卻很難找尋原因，因?yàn)槌绦蜃兓瘯r(shí)沒(méi)做記錄。

浸銀染色網(wǎng)狀纖維有背景（沉淀），如果染色時(shí)沒(méi)有精確的執(zhí)行染色步驟，則很難確定引起這樣問(wèn)題的原因，( Gordon& Sweets染色法，腎臟）。

 

步驟七十一

🙆正確：注意洗滌步驟。盡可能規(guī)范操作，因?yàn)檫@經(jīng)常引起結(jié)果的變化。

🙅 錯(cuò)誤：實(shí)驗(yàn)室工作人員使用不同的洗滌方法，有些人使用劇烈的攪拌，另一些則更為溫和。

使用相同的方法進(jìn)行肝染色，唯一的區(qū)別是操作人員沖洗，洗滌步驟。網(wǎng)狀纖維均為黑色，但A比B呈現(xiàn)的更好( Gordon& Sweets法）。

 

步驟七十二

認(rèn)真設(shè)置顯微鏡

🙆正確：在關(guān)鍵階段，如分化步驟使用顯微鏡在微觀下觀察控制。要注意在玻片濕潤(rùn)未封片的情況下，顯微鏡的設(shè)置，可能呈現(xiàn)虛假的背景染色。

🙅 錯(cuò)誤：對(duì)所有染色方法都只用裸眼觀察玻片。

A.濕組織(無(wú)蓋玻片)在顯微鏡下看關(guān)閉閉聚光器和光闌。注意假背景。

B.濕組織(無(wú)蓋玻片)在顯微鏡下看打開聚光器和光闌。注意清晰的背景。

 

接下來(lái)我們將會(huì)為大家?guī)��?lái)切片、優(yōu)化脫蠟和試劑應(yīng)用、考慮抗體交叉反應(yīng)等操作流程小貼士，感興趣的話可以關(guān)注我們徠卡101系列，后續(xù)我們將會(huì)為您奉上更詳盡的內(nèi)容。