開學通知

各位親愛的同（用）學（戶）們：

你們好！快快樂樂過暑假，高高興興迎開學！度過了一個歡樂、難忘的暑假生活，BI中國市場部將與你們一同邁進新的一學期！

新學期新期許：

做啥實驗都成功！！

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​上次我們已經淺論過細胞不貼壁的原因

今天我們來深扒細胞貼壁具體與哪些物質有關？

那么如何促進細胞貼壁？

許多細胞必須添加促貼壁物質才能貼壁生長，

促貼壁物質一般為細胞外基質，

如纖連蛋白、層粘連蛋白等。

不同細胞外基質對細胞粘附的效果一樣嗎？

細胞外基質的包被濃度是什么標準？

今天我們就來扒一扒

那些常見的促貼壁物質和包被方法~

大部分來自實體組織器官的細胞都會貼壁，但不是所有的細胞在體外培養的情況下都會貼壁。

密度大于培養基的細胞（絕大部分細胞）通過重力作用會沉降在底面上，這是種自然屬性，那么細胞要生存必定得改善這個環境，也是貼壁的主要原因-分泌細胞外基質和黏附因子（Extracellular matrix& Cell Adhesion Molecules，ECM&CAM），改善底面的結構，然后很自然就貼附在底面上了。

細胞粘附分子：是眾多介導細胞間或細胞與細胞之間相互接觸和結合分子的統稱。

細胞外基質：是由動物細胞合并分泌到胞外、分布在細胞表面或細胞之間的大分子。

二者大多數均為糖蛋白，因此具有較強的親水性——因此能不能貼壁不僅僅關乎細胞是否有這種能力，也與有無合適的底物（培養瓶）有關。

大多數的哺乳動物細胞在體內和體外均附著于一定的底物而生長，在體外時這些底物可以是其他細胞、膠原、玻璃或塑料等。

貼壁的過程：細胞首先分泌細胞外基質，這種細胞外基質黏附在支持物的表面（培養瓶，培養皿的底面）。然后，細胞通過其表面表達的黏附因子與這些細胞外基質結合。

   

▲ 貼壁原理圖

一些特殊的促細胞附著物質（如層粘連蛋白、纖維連接蛋白、Ⅲ型膠原、血清擴展因子等）可能參加細胞的貼附過程。這些促細胞附著因子均為蛋白質，存在于培養液尤其是血清中。在培養過程中，這些帶陽電荷的促貼附因子先吸附于底物上，懸浮的圓形細胞再與已吸附的有促貼附物質的底物附著，之后細胞將伸展成其原來的形態。所以細胞貼壁與否和細胞本身分泌細胞外基質的能力以及細胞本身表達的黏附分子的數量有關，也與培養皿壁的表面結構有關。

因此我們可以著手于這些促細胞附著物質，對癥下藥。

膠原蛋白（Collagen）

是支持細胞和組織生長的重要胞外基質蛋白，其形成的胞外環境有利于多種細胞的黏附、生長、遷移和分化。膠原主要包括I型膠原，Ⅱ型膠原，Ⅲ型膠原，Ⅳ型膠原，Ⅴ型膠原，Ⅵ型膠原幾種。

I型膠原——最常見的膠原蛋白，促進細胞的貼壁和增殖，用于內皮細胞，肝細胞，肌細胞等的培養。

軟骨細胞對II型膠原的黏附性較好；上皮細胞在Ⅳ型膠原底物上貼壁良好，而在I、II、III型膠原底物的培養板上貼壁情況較差。

膠原應用及建議細胞基質濃度：

 

纖維粘連蛋白（Fibronectin，FN）

一種位于細胞表面和血漿中的大分子蛋白質，是一種主要的細胞黏附分子，在細胞纖維基質中發揮結構和黏附性作用。

建議以1-5ug/cm²或者 0.5-50ug/ml的濃度作為細胞基質，但最佳濃度取決于細胞類型或研究目的、應用方向。

BI也提供Fibronectin solution（貨號: 03-090-1），可參考如下方法包被：

• 19ml無菌的PBS加1ml的纖連蛋白 (濃度50ug/ml)；

• 之后一個T25 (表面積25cm²)需用2.5ml包被, 所以視使用情形分裝包被；

• 一個T25加2.5ml纖維粘連蛋白溶液；

• 放4度至少30分鐘；

• 吸出纖維粘連蛋白溶液；

• 用無菌的PBS潤洗一次, 即可培養細胞。
   

層粘連蛋白（Laminin）

是細胞外基質的重要組成，存在于所有上皮細胞和內皮細胞的基底側，同時也是某些細胞與細胞間交互作用的中間媒介。層粘連蛋白有細胞及組織特異性，對于調節細胞功能具有重要作用，如：協助粘附、促進生長、引導遷移、調控分化、維持表型、防止細胞凋亡等。

在哺乳動物胚胎中，Laminin 521和511是最早表達的胞外蛋白，在2-4細胞期，已經可以檢測到。LN111支持hPSCs高效，符合GMP標準地分化為均一的多巴胺（DA）前體細胞。相比擬胚體（EB）為基礎的實驗方案，DA前體細胞的產量在LN111上增加40倍以上。

層粘連蛋白，根據不同細胞系，包被濃度一般為5-20ug/ml。

BioLamina人類重組層粘連蛋白：

化學成分限定，無異源動物成分。

使用1×DPBS(Ca²⁺/Mg²⁺)稀釋，并將包被溶液加入到培養皿中，確保包被溶液覆蓋整個培養皿表面，2-8℃孵育過夜或37℃孵育2小時。
 

玻連蛋白（Vitronectin）

屬于小分子蛋白，借由Vitronectin 受體讓細胞貼附于細胞基質中，主要促進細胞遷移，增加細胞貼附性、細胞分裂、細胞生長分化等，并協助細胞間的訊號傳遞。

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MSC促貼壁試劑是Biological Industries產品，搭配MSC NutriStem XF Medium使用，效果更佳。MSC促貼壁試劑針對多種來源的hMSC（骨髓，脂肪組織和臍帶）特別開發。

特點：
• 無異源體系 
• 適用于多種來源的MSC細胞貼壁
• 即用型，100倍濃縮液
• 適用于無血清體系
• 適用hMSC增殖和誘導分化試劑

可參考如下包被方法：

1.使用DPBS溶液，將MSC貼壁試劑稀釋100倍（1:100）。

2.加入適量的1XMSC貼壁試劑涂層培養皿或板；包被期間， 注意包被液不可以干掉！

3.輕輕搖動培養皿，確認貼壁試劑均勻分布于培養皿表面后，用封口膜包裹涂層的培養皿。

4.在2-8℃孵育過夜；或者在CO₂培養箱，37℃，至少孵育30分鐘。

5.接種前, 吸除貼壁試劑，再用DPBS輕輕沖洗培養皿，即可接種細胞。

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