1、基本信息

 

 

2、B7-H3基因功能簡介

 

圖1  B7-H3介導的腫瘤免疫^[1]

CD276 (Cluster of Differentiation 276)是人類CD276基因編碼的I型跨膜蛋白，屬于免疫球蛋白超家族，也稱為B7-H3。B7-H3的轉錄本在正常組織和實體腫瘤中廣泛存在，但其蛋白僅在腫瘤組織中高表達，正常組織中表達量極低。B7-H3主要在免疫細胞（如抗原提呈細胞、骨髓細胞、單核細胞、T細胞）上表達，配體未知，可抑制NK細胞介導的細胞裂解，同時增強對細胞毒性T細胞的誘導，選擇性產生IFNγ，另一方面也能對T細胞產生抑制作用，有助于腫瘤細胞的免疫逃逸。很重要的是，B7-H3在多種人類實體腫瘤中高度過表達，如膀胱癌、前列腺癌和黑色素瘤等，通常與患者的不良預后和較差的臨床治療結果相關。

3、表型分析

 B-hB7-H3小鼠mRNA表達分析

 

采用RT-qPCR法對WT和B-hB7-H3小鼠的B7-H3 mRNA表達進行品系特異性分析。

B-hB7-H3純合鼠中hB7-H3的mRNA表達與野生鼠C57BL/6相似，說明B7-H3人源化小鼠模型并沒有改變B7-H3的mRNA表達水平。

B7-H3抗體與B-CAG-hB7-H3 MC38細胞結合分析

 

通過流式細胞術測試B7-H3抗體與B7-H3人源化的鼠結腸癌細胞（hB7-H3-MC38）的結合。

單個活細胞圈門后用于進一步的分析。如圖所示，與同型對照抗體(hIgG)相比，抗人B7-H3抗體(enoblituzumab，內部合成）與hB7-H3-MC38細胞有很強的結合。

 

B7-H3抗體藥效驗證

 

抗人B7-H3抗體在B-hB7-H3小鼠中的抗腫瘤活性

(A) 抗人B7-H3抗體可抑制B-hB7-H3小鼠中的hB7-H3 MC38腫瘤生長。將鼠結腸癌hB7-H3 MC38細胞皮下植入純合B-hB7-H3小鼠（雌性，6-7周齡，n=5）中。當腫瘤體積達到約100 mm³時，對小鼠進行分組，然后使用抗人B7-H3抗體進行治療。(B)治療期間體重變化。如圖A所示，enoblituzumab（內部合成）在一定程度上能抑制hB7-H3 MC38腫瘤生長，也表明B-hB7-H3為抗人B7-H3抗體的體內藥效評估提供了一個有效的臨床前動物模型。（A）腫瘤平均體積±SEM，（B）小鼠平均體重±SEM。

 

4、研究進展

最近的研究表明，B7-H3在腫瘤的生長、侵襲、遷移及血管生成和轉移中起著重要作用，由于其在免疫逃逸中的作用，B7-H3已成為新的免疫治療靶點。主要免疫治療手段有：單抗、雙抗、小分子、ADC藥物、CAR-T治療等，臨床上進展較快的是MacroGenics公司的enoblituzumab單抗及在此單抗基礎上改造獲得的B7-H3*CD3雙抗（MGD009），B7-H3-ADC藥物（MGC018）等， Daiichi Sankyo 公司的B7-H3-ADC藥物（DS-7300a）。聯合治療方面，B7-H3和PD-L1對T細胞產生抑制作用，改變T細胞的微環境以逃避抗腫瘤免疫應答。而B7-H3和CTLA4也可能有協同作用，類似于B7-H3在PD-1通路中一樣。

 

圖2  B7-H3的潛在作用機制^[2]

 

1、基本信息

 

 

2、CCR4基因功能簡介

 

圖3  CCR4在成人T細胞白血病/淋巴瘤細胞中類似CD4+CD25+Treg的功能^[3]

 

CCR4 (C-C motif chemokine receptor 4)是CCR4基因編碼的一種七次跨膜蛋白，屬于G蛋白偶聯受體家族，也稱為CD194。主要配體有胸腺激活調節趨化因子（TARC/CCL17）、巨噬細胞的趨化因子（MDC/CCL22）、RANTES、MCP-1和MIP-1α。趨化因子是一組結構相關的小多肽分子，調節不同類型白細胞的運輸，在免疫系統的發育、穩態和功能中發揮著一定作用，對中樞神經系統細胞以及參與血管生成或血管停滯的內皮細胞也有影響。CCR4主要表達在T細胞的幾個亞群中，如Th2、Treg、Th17和Th22，在血小板表面也有表達。很多腫瘤細胞表面也高表達CCR4，如成人T細胞白血病/淋巴瘤、T細胞惡性腫瘤、宮頸癌、食道癌、腎癌、腦癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌及胃癌等，因此，血液癌細胞和非血液癌細胞都可以表達CCR4。與CCR4相關的疾病主要是自身免疫病如哮喘、皮炎和T細胞淋巴瘤。

 

3、表型分析

 B-hCCR4小鼠蛋白表達分析

 

通過流式細胞術對野生型C57BL/6和B-hCCR4純合鼠中
進行分析。

收集野生型C57BL/6和B-hCCR4純合鼠的脾細胞，并用種屬特異性抗CCR4抗體進行流式細胞術分析。結果顯示：在C57BL/6小鼠CD4+ T細胞表面檢測到mCCR4，在B-hCCR4純合鼠CD4+ T細胞表面檢測到hCCR4。

 

通過流式細胞術對野生型C57BL/6和B-hCCR4純合鼠中CCR4蛋白表達進行分析。

收集野生型C57BL/6和B-hCCR4純合鼠的脾細胞，并用種屬特異性抗CCR4抗體進行流式細胞術分析。結果顯示：在C57BL/6小鼠Treg細胞表面檢測到mCCR4，在B-hCCR4純合鼠Treg細胞表面檢測到hCCR4。

 

4、研究進展

在研的CCR4的拮抗劑包括小分子化合物和抗體，其中協和麒麟的CCR4抗體藥Mogamulizumab（強ADCC作用）于2012年在日本首次被批準用于治療其它惡性血液腫瘤，并于2014年被批準用于治療CTCL（Lymphoma, cutaneous T cell）。CCR4抗體治療腫瘤主要有2種方式：腫瘤表達CCR4，利用抗體的ADCC效應直接殺傷腫瘤；腫瘤表達CCR4配體，招募表達CCR4的Treg，利用抗體清除Treg解除免疫抑制。

 

圖4  CCR4抗體的作用機制^[4]

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Note：

★ the in vivo efficacy was validated by using the reference antibodies (in Clinical Trail Stage).

√ the in vivo efficacy was validated by using partners antibodies (in Preclinical Stage).

〇  Human protein expression was validated by FACS.

 

參考資料

[1] Wang L, et al. B7-H3-mediated tumor immunology: Friend or foe? Int J Cancer. 2014.

[2] Li G, et al. B7-H3 in tumors: friend or foe for tumor immunity? Cancer Chemother Pharmacol. 2018. 

[3] Ishida T, Ueda R. Immunopathogenesis of lymphoma: Focus on CCR4. Immunotherapy. 2014. Cancer Sci. 102 (1), 44-50

[4] Afifi S, et al. A drug safety evaluation of mogamulizumab for the treatment of cutaneous T-Cell lymphoma. Expert Opin Drug Saf 18 (9), 769-776, US 20180094064A1