原代細胞培養在藥物測試的使用與注意事項
長期以來，科學家多依賴永生化的細胞系來進行各種研究，但在過去十年，隨著細胞生物學的發展，細胞培養領域發生了巨大變化，新型的技術和培養試劑讓使用原代細胞作為研究對象成為可能。相比于細胞系，原代細胞更多保留了體內原始組織的生物學特征，如生長和衰老，因此通過原代細胞可建立更好的細胞疾病模型。
原代細胞（Primary cells）是指來源活體組織，經過特定分離方法制備而成的初始細胞。
原代細胞離體時間短且不經過永生化過程，其生物學特性未發生很大變化，仍保持原有的遺傳特征，可更好地反映細胞在體內的生長狀態，從而獲得與體內生理功能更接近的數據，很適合用于藥物測試、細胞分化和轉化等實驗研究。
01 原代細胞與細胞系該如何選？
原代細胞生長緩慢，一般認為，原代細胞培養的第1代和傳代到第10代以內統稱為原代培養。原代培養的細胞一般傳至10代左右就不容易傳下去了，細胞的生長會出現停滯，大部分細胞衰老死亡。但是有極少數的細胞能夠度過“危機”而繼續傳下去，這些存活的細胞一般能夠傳到40-50代，這種傳代細胞叫做細胞株。當細胞傳至50代以后又會出現“危機”，這時有部分細胞的遺傳物質發生了改變且帶有癌變的特點，從而可能無限制地傳代下去，這種傳代細胞稱為細胞系。
細胞系因其容易培養、種類多、產量可觀的優點一直是細胞水平研究的首選，且價格相對低廉，但細胞系“價廉卻不一定物美”。研究發現，細胞系在連續培養的過程會不斷發生突變，長時間的多次傳代可能會導致細胞系的基因型和表型都發生變化，從而影響實驗結果。例如有研究報道，HEK293經腺病毒轉染后得到的細胞更接近未成熟神經元細胞；MDA-435作為乳腺癌細胞被廣泛用于各種研究，但近年來越來越多證據表明其可能為一種黑色素瘤細胞。
原代細胞則不存在這些問題，雖然原代細胞分離和培養的成本可能相對更高，但原代細胞作為更接近體內環境的研究模型，可讓你的研究結論更加接近“事實”，且原代細胞的使用可減少動物實驗所需的成本開支。另外在某些人體體內無法進行的實驗，原代細胞因其高度保持了在體內的生物學特性，可在一定程度解決這個問題。
由于永生化的細胞系與體內組織細胞的生物特性相差甚遠，導致許多生理和病理的過程難以重復，近年來，原代細胞正逐步成為細胞和分子生物學研究的首選工具，為疾病機制、藥物研發等提供了高質量的模型。但不可能否認的是，細胞系在科研中的地位仍十分重要，例如在標準化方案的確立上細胞系是良好的工具，某些需要大量細胞的研究如全基因組遺傳篩選，由于原代細胞數量有限且對培養條件要求苛刻，細胞系也是第一選擇。
02 原代細胞的分離與培養
原代細胞是出了名的難養，對培養環境和實驗操作的要求更苛刻。原代細胞在體外通常只能傳代少數幾次，某些原代細胞（如神經元細胞）甚至無法進行傳代。對于研究人員來說，如何才能經濟高效地培養好原代細胞，并圍繞這有限幾次傳代的細胞設計實驗，是更大的一個挑戰。
原代細胞是取材于切除的動物組織，通過酶處理，在適當的條件下培養直至達到足夠的數量。分離的原代細胞有兩種類型：貼壁細胞（錨定依賴性生長）和懸浮細胞（錨定非依賴性），貼壁細胞多來自器官組織，而懸浮細胞多來自血液系統的細胞。
從組織制備原代細胞，即使捱過了極其嚴苛的解離步驟，不嚴謹的分離操作可能會導致細胞生長緩慢、表型不一致甚至細胞污染，特別是由于組織中可能含有細菌等微生物，污染問題對于原代細胞的分離和培養是一個很大的隱患。而為了讓研究人員不再為這些問題頭疼，現在已經出現了一些細胞公司可供應現成的原代細胞，并對應配有充分優化的培養基和實驗方案，這使得原代細胞的培養和研究比以往要輕松得多。
而對于具備自主從組織中獲取原代細胞的實驗室，也建議以商業化的原代細胞作為對照，采用均一性和穩定性更好的P2/P3代次進行實驗，并用專門的原代細胞培養基進行培養，最大限度提高原代細胞的生長。
好物推薦
OriCell團隊在長期的細胞研究過程中不斷優化實驗條件，針對不同客戶研究需要，提供包含神經元細胞、星形膠質細胞在內的多種OriCell原代細胞產品，產品經過細菌、真菌、霉菌、支原體和病毒檢測，表達多種神經細胞特異性標記。針對OriCell原代細胞的營養需求研發專用的培養產品。OriCell原代細胞完全培養基特別添加能有效改善細胞生長狀態的營養物質和針對不同物種特別甄選的優質培養液，適合各類原代細胞的體外培養。
☑ 神經元＋神經元完全培養基
OriCell神經元系列產品取自18.5天胎鼠或者新生鼠的海馬區和大腦皮層，原代直接凍存。檢測結果表明，本產品無細菌、真菌、霉菌、支原體和病毒污染，Tubulin和MAP2表達水平高。
☑ 星形膠質細胞＋星形膠質細胞完全培養基
OriCell星形膠質細胞系列產品取自新生鼠的大腦皮層，經過純化傳代擴增至第一代凍存。檢測結果表明，本產品無細菌、真菌、霉菌、支原體和病毒污染，GFAP表達水平高。
☑ 人成纖維細胞＋成纖維細胞完全培養基
人成纖維細胞來源于牙周膜，檢測結果表明，本產品無細菌、真菌、霉菌、支原體和病毒污染。
☑ 小鼠胚胎成纖維細胞＋成纖維細胞完全培養基
OriCell小鼠胚胎成纖維細胞取材于懷孕13.5天的ICR小鼠胚胎，使用其專用完全培養基貼壁培養至第一代，并且經過γ-射線照射處理后凍存。經檢測，確認無細菌、真菌、霉菌、支原體和病毒污染，經細胞培養測試能夠支持ES細胞的生長，維持ES的未分化狀態。
☑ 人臍靜脈內皮細胞＋人臍靜脈內皮細胞完全培養基
血管內皮細胞是覆蓋在血管內膜表面縱向排列的單層扁平細胞，經檢測，確認無細菌、真菌、霉菌、支原體和病毒污染。
關于OriCell®
OriCell®是賽業生物旗下致力于干細胞試劑及干細胞技術服務的子品牌，作為擁有14年歷史的科研干細胞供應商，OriCell®旗下擁有規模龐大、品種齊全的科研干細胞庫。自主開發了百余種干細胞及原代細胞產品，獨立起草的數十種科研干細胞標準更已成為國際主要參考的干細胞技術標準。OriCell®干細胞及相關培養基已服務數萬客戶，獲得了市場占有率和滿意度的雙贏。OriCell®提供的干細胞誘導分化服務、細胞基因編輯服務與穩轉細胞株構建服務已幫數千名科研人員解決了科研難題，產品與技術已直接應用于包括CNS（Cell, Nature, Science）三大期刊在內的3600余篇學術論文。如有需要，歡迎聯系我們咨詢。
