PCR實驗室又稱基因擴增實驗室,實驗室原則上分為4個單獨的工作區域,前雨區為擴增前區,后兩區為擴增后區。擴增前區與擴增后區應嚴格分開。
實驗材料、試劑、記錄紙、筆、清潔材料等,只能從擴增前區流向擴增后區,即從試劑準備區到樣品制備區到擴增區再到擴增產物分析區,不能逆向流動。
實驗室的氣流也應從擴增前區流向擴增后區,不得逆向流動。各工作區域應設置緩沖間,工作間與緩沖間之間宜安裝連鎖裝置。不同功能的核酸檢驗工作區應是分隔獨立的工作室,并有明顯的標志,各區間不能直通。各區之間如果是緊密相連,需安裝物品傳遞窗。每個工作區域的頂部應安裝紫外燈,紫外燈的波長為254m,安裝數量為每20m安裝一支40W的紫外燈。
PCR實驗室理想的布局應有一個專用走廊,試劑準備區、樣品制備區、擴增區和產物分析區很規范地排列在一起,前三個區各有一個緩沖間,可供換工作服和工作鞋使用,頂上可裝一紫外燈。
內實驗區域設為正壓或常壓狀態,緩沖間內設為負壓狀態(可上設一抽風裝置),使這三個區的空氣流向為由實驗區域內向外,緩沖間內通向內實驗室和走廊的門可安裝一種連鎖裝置,當一個門打開時,另一門必須處于關閉狀態,防止出現兩個門同時打開的情況。
產物分析區可不設緩沖間,但應設為負壓狀態(裝一個排風扇即可)、使空氣流向由外向內,以防止擴增產物的隨空氣流出。
每一區域都須有明確的標記,工作按試劑準備區、樣品制備區、擴增區至產物分析區單一流向進行,各區的儀器設備包括工作服、鞋、實驗記錄本和筆等都必須專用。
以上要求做不到的話,這些基本要求務必做到:四個區域必須是相互獨立的;各區的儀器設備及各種物品必須是專用的;各區完全獨立,緩沖間可有可無。如為一個區套一個區的模式,區間不能直通,應有緩沖間,供換工作服及鞋子用,并保證兩個區域間始終處于完全的分隔狀態;產物分析區應安裝排風扇或其他抽風裝置,維持負壓。
②PCR實驗室的設備清單
PCR實驗室的主要設備:實驗臺、天平、冰箱、低溫冰箱、離心機、洗眼器、加樣器、振蕩器、紫外燈、冰箱、生物安全柜(或潔凈工作臺、或者排風柜排毒柜)、恒溫水浴、上下水設備、廢棄物容器、通風排風系統、核酸擴增設備、酶標儀、洗板機、水浴箱、實時熒光定量PCR儀等實驗室相關配件。以上設備根據各區的需求,數量不定。具體實驗室設備清單請致電我們或留言
③PCR實驗室各區的作用功能
PCR實驗室包括4個區域:試劑準備區/樣品制備區/擴增區/擴增產物分析區,各區分別滿足不同的操作
試劑準備區:擴增試劑的配制、分裝和保存。未設緩沖間的試劑儲存和準備區,工作區域為正壓。用于擴增的試劑應冰凍儲存。
樣品制備區:實驗室樣品的混樣和測試樣品的制備。未設緩沖間時工作區域為負壓或減壓,可安裝排風系統。所用的器具在使用前應經過徹底清洗并消毒,防止交叉污染。
擴增區:PCR擴增反應體系的配制和模板的加入,核酸擴增。未設緩沖間的擴增區,工作區域為負壓或減壓,可安裝排風系統。加樣應在超凈工作臺(生物安全柜)內進行,超凈工作臺的氣流方向宜選擇垂流式。
擴增產物分析區:擴增產物的測定。未設緩沖間的擴增產物區,工作區為負壓或減壓,應安裝排風系統。若實驗僅采用全自動擴增檢測儀(如實時熒光定量PCR儀),可將擴增區與擴增產物分析區合并為一個區。
④PCR實驗室的裝修施工
PCR實驗室裝修的要點
PCR實驗室的墻體和頂棚應結構牢固、氣密性好;所有陰角宜采用圓弧形線條過渡;墻體內壁光潔、不吸附、耐腐蝕易清洗消毒;地面材料應滿足無縫隙、無滲漏、光潔、耐腐蝕的要求。
地面使用PVC卷材地面或自流坪地面,整體性好,便于進行清掃,耐腐蝕。沒有條件的也可采用水磨石地面,或大塊的瓷磚(≥800mm)接縫需要小于2mm。燈具要選用凈化燈具,能達到便于清洗、不積塵的特點。
在實驗區和緩沖區頂部以及傳送窗內部要安裝外燈,消毒使用。在準備區和制備區設置移動緊外線燈,對實驗臺等進行局部消毒。
試劑和標本應通過機械連鎖不銹鋼傳遞窗傳遞。
⑤PCR實驗室的通風系統
PCR實驗室的各個區域之間應具備單向的實驗工藝流、物流、人流與氣流,形成單向流程的保護屏障,避免實驗之間的相互干擾,防止核酸氣溶膠對實驗過程造成污染產生假性結果。
PCR實驗室的凈化要求,為避免各個實驗區域間交又污染的可能,優先采用全送全排的氣流組織形式。同時,要嚴格控制送、排風的比例以保證各實驗區的壓力要求。
⑥PCR實驗室建設和使用規范的注意事項
根據實驗室建設預算和實際使用情況選擇對應的設備、潔凈度、周邊設施等
實驗室區的工作人員安全防護方面要有應急方案
實驗區內的所有相關物品都要做明顯的標記,防止混淆
PCR各區域應盡量避免減少不必要的走動
建議實驗室工作人員不同區域不同的工作服,且工作服不能帶出
操作者培訓上崗,經常更換使用的一次性醫療耗材