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微芯片熒光PCR在快速檢測畜禽動物源性成分的應用

瀏覽次數:2128 發布日期:2020-4-16  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負
 我國是禽畜產品生產和消費大國。食品及飼料中動物源性成分的檢測關系食品安全和畜牧業安全。近年來,市場上屢次出現不法分子在肉制品中摻雜摻假現象,食品安全問題層出不窮,尤其是牛羊肉中,經常被曝光其中摻雜了一些豬肉、鴨肉甚至狐貍肉、老鼠肉等,涉嫌虛假宣傳欺詐消費者和侵犯消費者的合法權益,降低食品安全的公眾信譽,造成不良社會影響。食品及飼料中動物源性成分檢測涉及到生產、運輸、銷售以及加工等各環節,農業部也相應出臺各項法規,為更好保證食品安全和我國畜牧業安全生產,急需可靠的檢驗標準和方法手段,而GB/T38164-2019《常見畜禽動物源性成分檢測方法實時熒光PCR法》頒布實施,對畜禽動物源性成分檢測提供可靠監督手段,有效提高檢驗檢疫工作效率。
國家市場監督管理總局、國家標準化管理委員會聯合發布GB/T38164-2019《常見畜禽動物源性成分檢測方法實時熒光PCR法》該標準由中國檢驗檢疫科學研究院、大連海關、青島海關、上海海關、沈陽海關起草。該標準于2019年10月18日正式實施。該標準規定了了常見畜禽動物源性成分的實時熒光PCR檢測方法,適用于肉及加工品、內臟、乳、動物飼料中黃牛、牦牛、水牛、綿羊、山羊、豬、駱駝、馬鹿、梅花鹿、馴鹿、兔、狗、雞、鴨、鵝、鵪鶉、鴿子、火雞、貓、狐貍、水貂、貉、鼠物種成分的Taqman探針實時熒光PCR定性檢測。​



目前國內外對于動物源性成分的檢測報道主要有顯微鏡檢法、紅外光譜法、ELISA、普通 PCR、基因芯片法,熒光定量 PCR 等方法,基于核酸檢測的方法是最普遍、最準確的檢測技術,其常用的技術方法包括普通定性 PCR、巢式 PCR、多重 PCR、熒光定量 PCR 等方法。普通定性 PCR 方法檢測效率低,尤其檢測多指標樣本時更加費時費力。而熒光定量 PCR 方法靈敏度高,但其成本高,因此推出一種快速、方便、靈敏度高、成本低的檢測方法具有實際應用意義。

前LUMEX專利凍干芯片結合熒光定量PCR技術,與傳統的熒光定量PCR方法相比,將試劑引物涂布在凍干芯片上,通過熒光定量PCR技術,實現了快速、方便、靈敏、成本低動物源成分快速檢測,操作便捷,大幅度縮短了檢測周期。在檢測項目方面,一張基因芯片即可同時對多種靶向基因并行檢測,一次實驗即可得出全部結果,比傳統方法簡便、快捷、更節省人力,提高了檢測通量,實現多重檢測效果。同時極大減少了操作人員的工作量并避免了實驗的人為誤差,方便、快捷、準確。因凍干芯片熒光定量PCR法具有快速、簡便、成本低、靈敏度高、假陽性率低、高通量等特點,在實際工作中具有很大的意義,同時對開發快速高通量多指標檢測的方法具有廣泛應用。


LUMEX凍干芯片平臺結合熒光定量PCR技術,針對中國市場中常見食品和飼料中主要動物源性成分,按照國內檢測標準設計凍干檢測芯片,可一次性對樣品中的多種動物源性成分進行篩檢,包括:牛、豬、羊、駱駝、水牛、馬、驢等畜禽動物源性成分,并行反應檢測目標的數量得到很大提升,克服動物源性成分熒光定量PCR檢測方法的核心問題,極大地降低檢測成本和工作量,提高檢測效率和準確性。此外實時熒光微芯片技術可根據客戶實際檢測需求定制動干芯片,實現一張基因芯片檢測多重靶向基因。

實時熒光微芯片技術優勢如下:1)操作簡單,經過一次樣本前處理,凍干芯片是平臺實現 PCR 擴增,實現單芯片同步檢測樣本中多種動物源性成分,具有平行分析和多重判斷的特點;2)檢驗對象完備,包含了當前市面上常見、常檢的動物源性成分檢測指標,并且可以很方便的加入新的檢測指標;3)專利親疏水芯片涂層結合凍干試劑,減少交叉污染,有效減少操作人員工作量,降低實驗人為誤,,提高了系統的靈敏度和準確性;4)凍干試劑平臺簡化操作步驟,操作簡單,無需冷鏈運輸,適用于食品中動物源性成分的大規模檢測

檢測分析與擴增結果判定。
對樣品進行前處理,將處理后的樣品分成三等分,包括待測樣品,復檢樣品和留存樣品。 依據GB/T 35918的方法進行提取,也可用等效DNA提取試劑盒提取DNA。按照GB/T34796方法測定并計算DNA濃度,判定DNA和純度。

檢測過程中設置陽性對照、陰性對照和空白對照。樣品和對照設置2個平行的反應體系,分別進行靶向基因和內參基因擴增, 以Ct平均值作為最終結果。如果Ct值≤35.0,判定為被檢樣品為陽性。 如果Ct值≥40.0,判定被檢樣品陰性;如果35.0<Ct值<40.0,則重復一次。如再次擴增后Ct值仍為<40.0,判定被檢樣品陽性;如再次擴增后,Ct值≥40.0,判定被檢樣品陰性。
 

生肉樣品(n=6)的微芯片實時PCR結果:牛(粉色曲線)、羊(青色曲線)、豬(綠色曲線),只有相應的試劑盒對目標樣品呈陽性,其他試劑盒呈陰性。陽性對照(藍色曲線)和內部對照(IC)(黃色曲線)為陽性。

結果可見,動物源成分凍干芯片檢測結果確,顯示了良好的物種檢測特異性,檢出的成分與預先提供的檢測結果一致,凍干片熒光定量PCR技術具有良好的特異性、可重復性、靈敏度和穩定性,能夠同時進行多樣品、多項目檢測,具有快速、靈敏、準確、高通量、低成本的特點,是目前傳統方法所不具備的。
 
發布者:北京魯美科思儀器設備有限公司
聯系電話:010-64129525
E-mail:lumexcn@lumex.com.cn

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