基于細(xì)菌外膜囊泡的H1N1/冠狀病毒雙聯(lián)疫苗的制備

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基于細(xì)菌外膜囊泡的H1N1/冠狀病毒雙聯(lián)疫苗的制備

來(lái)自德國(guó)吉森大學(xué)等的科學(xué)家們?cè)?019年第7期的《Vaccines》雜志上發(fā)表了題為“Bacterial Outer Membrane Vesicles (OMVs)-Based Dual Vaccine for Influenza A H1N1 Virus and MERS-CoV”的文章。文中，研究人員開(kāi)發(fā)了一種基于細(xì)菌外膜囊泡（OMV）的疫苗，其可遞呈甲型流行性流感病毒（H1N1）2009株（H1N1pdm09）H1型血凝素（HA）和中東呼吸道綜合征冠狀病毒（MERS-CoV）受體結(jié)合結(jié)構(gòu)域（RBD）的抗原性穩(wěn)定嵌合融合蛋白，縮寫(xiě)為OMVs-H1/RBD。研究結(jié)果表明，嵌合抗原可誘導(dǎo)對(duì)抗兩種毒株的特異性中和抗體，免疫的小鼠可形成針對(duì)H1N1pdm09的保護(hù)，并有效中和MERS-CoV。所以，可認(rèn)為，遞呈病毒性抗原的OMV疫苗是一種對(duì)抗兩種不同病毒感染的安全、可靠的方法。

實(shí)驗(yàn)操作中，E.Coli DH10β菌轉(zhuǎn)染pMP-H1/RBD質(zhì)粒，LB瓊脂糖平板克隆篩選，接種至5mL 液體LB，培養(yǎng)16h，然后培養(yǎng)液接種至大體積培養(yǎng)。

OMV通常從轉(zhuǎn)染的E.Coli DH10β細(xì)胞的上清液純化。操作時(shí)，2L的DH10β培養(yǎng)液于37℃ LB肉湯中搖瓶培養(yǎng)，直到對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期（OD600nm 1.0）。生產(chǎn)的細(xì)菌離心，上清液使用0.22μm過(guò)濾器過(guò)濾，去除殘留的菌體。之后，無(wú)細(xì)菌的上清液用KrosFlo KR2i 切向流過(guò)濾系統(tǒng)及100kD中空纖維膜超濾濃縮至終體積30mL。獲得濃縮液進(jìn)一步4℃ 150,000xg超速離心3h，分離OMV餾分。之后，含有OMV的沉淀重懸于300μL PBS，除菌過(guò)濾，并于-80℃儲(chǔ)存。

為對(duì)含有嵌合HA/RBD抗原的OMV進(jìn)行鑒定，使用免疫印跡分析確定OMV中存在MERS-CoV的RBD和H1N1pdm09的H1-HA，并確認(rèn)存在連接RBD的HA病毒蛋白，其分子量與HA0-RBD之和相當(dāng)。

原文：M.M.Shehata, A.Mostafa, L.Teubner, et al., Bacterial Outer Membrane Vesicles (OMVs)-Based Dual Vaccine for Influenza A H1N1 Virus and MERS-CoV. Vaccines, 2019, 7(46), doi:10.3390/vaccines7020046.