當柱子塔板數降低到新柱子百分之幾時需更換
 

色譜工作者常會碰到這樣的問題，什么時候該換色譜柱了?色譜柱的塔板數能體現色譜柱的狀態嗎?確定表明一支色譜柱應該“退休”的標準，從經驗來看，當一支色譜柱的塔板數降低到新柱子的百分之多少時就可認為該色譜柱不能再使用了呢?將塔板數作為評價色譜柱質量的唯一指標合適嗎?如何判斷一根色譜柱不能再用了呢?
 

     塔板數是一個粗略的指標，不能作為評價色譜柱的標準。通常使用塔板數來考察色譜系統：將新柱子接到儀器上，根據色譜柱生產商提供的測試條件測試該色譜柱，你應該得到和分析報告上同樣的結果。最差也應該得到比報告值低10%的塔板數。如果你所測得的塔板數遠遠低于廠家提供的報告數據，這就說明你的色譜系統可能存在一些問題。進樣器、柱外效應、毛細連接以及檢測器都是容易出現問題的地方。

利用壓力、分辨率和峰形混合指標考察色譜柱的狀態
 

相信每個色譜工作者都會關心分辨率，分辨率是考察一根色譜柱分離具體樣品好壞程度的指標。然而需要考慮的另一個因素是塔板數對分辨率的影響僅僅是平方根的關系，這意味著當一根色譜柱的塔板數下降50%，分辨率僅僅下降7%。而當一根色譜柱塔板數下降為新柱子一半時，肯定會出現其它更加嚴重的癥狀提示你這根色譜柱的壽命不長了。在實際工作中，大多數色譜方法僅僅需要這些塔板數的一半，這些色譜方法還有優化的空間的。可見，色譜柱的塔板數不是分離中最重要的參數。較好的方法是使用壓力、分辨率和峰形的混合指標來考察一根色譜柱的狀態。
 

     （1）壓力測量：壓力測量最容易，通常確定的色譜方法要滿足以下要求：用新柱子時柱壓不高于2500psi，在任何情況下壓力都不超過3000psi。盡管現代的液相色譜系統都可在更高的壓力下使用，但由于高壓產生的系統損耗和泄漏的問題會很嚴重。當壓力超過3000psi時，需要考慮更換進樣器和色譜柱之間的0.5mm孔徑的在線濾片。如果更換濾片后壓力仍然高，則色譜柱的濾片或者是色譜柱已經被污染，這提示該換柱子了。有統計表明，超過60%的色譜柱損壞是由壓力過高引起的。

     （2）分辨率：分辨率是考察色譜柱的一項重要指標，只要兩個組分可以獲得基線分離，對該分析物的定量就不會有什么問題。對于對稱的高斯峰而言，1.5的分辨率即可得到基線分離；若Rs在1.7~2.0之間則更好。若峰拖尾嚴重則需要更高的分辨率。將分辨率作為色譜柱評價指標的好處是可以直觀地看到相鄰峰的分離情況。

     （3）峰形拖尾：考察色譜柱質量的一個標準是峰形拖尾情況，廠家測試報告的峰形都非常漂亮，但這并不代表該色譜柱分析實際樣品的情況。實際樣品中總是含有或多或少引起峰形拖尾的組分。值得一提的是含有氮原子的化合物，這些化合物和硅膠骨架上的游離硅羥基結合非常緊密，隨著色譜柱使用時間越長，鍵合相流失，拖尾更加嚴重。但拖尾情況的改變不像分辨率的改變那樣能夠馬上看出來，因此最好定一個拖尾因子的上限，如美國藥典規定拖尾因子不超過1.8。

確定色譜柱“退休”標準最佳時間
 

       確定色譜柱“退休”標準的最佳時間是當開發分析方法或進行方法認證時。通常在開發分析方法的過程中會試驗幾根色譜柱，分析足夠多的實際樣品，依此可以知道當分離變差時是什么樣的情況，一般傾向于在開始時使用一個寬的范圍。根據經驗，如果在開始時緊縮系統適用性要求，在方法認證后再放寬這個要求是很困難的。在分析實際樣品之前進行系統適用性考察，以確保該色譜方法滿足分析者可以接受的標準