熒光PCR法測貓杯狀病毒的檢測方法及原理
瀏覽次數:7742 發布日期:2019-12-20
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輕微的貓杯狀病毒通常會讓貓咪無精打采,有時會出現打噴嚏、口部眼部的分泌物增多等情況。病情嚴重是會導致貓咪呼吸困難,引起肺部炎癥。雖然該病的率很低,但是卻有著很強的傳染性,需要及時進行診斷。由于多種病毒均可引起貓的呼吸道疾患,且癥狀具有類似之處,因此診斷較為困難。
貓杯狀病毒(FCV)屬于RNA病毒,具有高變異性。在貓群中,無毒力或輕度毒力FCV的流行率高達36%。感染后貓體一般會表現為呼吸道病狀和口腔潰瘍,較少出現系統性病癥。
救助所和醫院的貓感染后潛伏期是1-5天,家貓感染后潛伏期可能長達12天。這種病在成年貓中更嚴重。VS-FCV疾病的臨床病理特征與“傳統”FCV有很大區別,已報道的VS-FCV疾病癥狀包括持續高燒、厭食、抑郁、面部和四肢水腫、面部耳廓及足部有潰瘍或脫毛、肺水腫、凝血異常、胰腺炎、肝壞死。感染VS-FCV比傳統的FCV更早表現出病理變化。
診 斷
當貓出現以下情況,VS-FCV的可能性較大。
全身性癥狀不能用其他原因來解釋,包括面部或肢體水腫/大面積結痂/身體、腳、面部耳廓脫毛/皮膚潰瘍;
組織活檢或尸檢發現肝細胞壞死;
成年貓比小貓受影響更嚴重。
無論是傳統FCV還是VS-FCV感染都不能僅根據臨床癥狀進行診斷。FCV有很多癥狀表現,每一種癥狀也可能是其他病原體引起的。例如口腔潰瘍通常是FCV感染的癥狀,但貓皰疹病毒同樣可以引起口腔潰瘍。不正確稀釋的季銨和苯酚消毒劑也會導致嚴重的口腔潰瘍,呼吸道癥狀。
VS-FCV具有快速生長、體外組織培養易于傳播、環境穩定性更強的特點。相比于非VS-FCV感染的細胞,VS-FCV感染的細胞保持ATP時間更長。通過維持細胞ATP水平,VS-FCV分離物可以延遲細胞凋亡,產生并釋放更多的病毒顆粒。另外,維持細胞內ATP水平可以促進細胞的能量依賴性凋亡和防止細胞壞死。通過限制壞死細胞引起的炎癥反應,利于病毒在體內復制。
這里介紹的方法是采用熒光PCR方法,可對口腔、鼻或眼結膜拭子樣本中的貓杯狀病毒(Feline Calic Virus,FCV)核酸片段進行定性檢測,可用于臨床對貓杯狀病毒的輔助診斷。適用于疑似FCV感染貓的輔助診斷,檢測樣本為感染貓的口腔、鼻或眼結膜拭子樣本。貓杯狀病毒檢測試劑盒(熒光PCR法)具備基線噪音小、陽性信號明顯、反應性好等優點。
檢測原理:貓杯狀病毒檢測試劑盒針對貓杯狀病毒保守基因片段設計特異性引物及Taqman熒光探針,該探針能與引物擴增區域中間的一段核酸序列發生特異性結合。在PCR延伸反應中,Taq酶的外切活性將5’端熒光基團從探針上切割下來,使之游離于反應體系中,從而脫離了3’端熒光淬滅基團的屏蔽,分離后的熒光基團在機器特定光源的激發下產生熒光,再由儀器的檢測單元進行檢測,從而實現對FCV的特異性檢測。BIOG試劑盒使用內質控體系,能夠實時監測整個檢測過程,有效防止假陰性結果的產生。
【BIOG貓杯狀病毒定量PCR檢測試劑盒產品特點】
1.基線噪音小,陽性信號明顯,非常容易判斷陰陽性;
2.靈敏度高,能夠檢測出感染早期的弱陽性樣本;
3.設置有內標,可以監控從提取到RCR檢測的全過程,可及時排除假陰性結果;
4.特異性好,與同部位感染的皰疹病毒、支原體、衣原體、波氏桿菌、鏈球菌、金黃色葡萄菌等病原菌無交叉反應;
5.反應性好,可檢出不同基因型的杯狀病毒和基因變異的杯狀病毒。