胍丁胺對糖尿病神經病理性疼痛大鼠的干預效應及機制
胍丁胺對糖尿病神經病理性疼痛大鼠的干預效應及機制
摘要：
目的：觀寮胍丁胺(AGM)對糖尿病神經病理性疼痛(ⅠNP)模型大鼠的干預效應,并探討其可能的機制。
方法：將40只雄性SD大鼠隨機分為5組各8只,除對照組外其余各組單次腹腔注射鏈脲佐菌素65mg/kg構建糖尿病模型;足底觸痛伩測量糖尿病大鼠杋械縮足閾偵(\wT)和熱縮足潛伏期(Tw),降嘔〉20%基礎閾值視為DNP大鼠模型制爺成功。ACM50組、ACM300組、GP組分別腹腔注射AGM150、300mg/kg和加巴噴丁100mg/g,對照組、模型組腹腔注射等量生理鹽水。分別于STZ注射前1d(0d),SYZ注射后7、14、21、28d,取尾靜脈血檢測血糖,爛底觸痛儀測量MWT、TWL:檢査后處死大鼠取脊髓組織,釆用 Western blotting法檢測磷酸化細胞外調節蛋白激酶活性。結果與對照組比較,其他各組血糖均升高,MWT降低、TW.縮短(P均<0.01)。與模型組比較,AGM150組、AGⅥ300組于STZ注射后21、28d血糖降低(P<0.05或<0.01),GP組血糖差異無統計學意義:AGM150組、AGM300組MwT(21、28d)升高、TW.(28d)延長(P均<0.01),GP組21、28d時MWT升高TWL延長(P<0.05或<0.01);于SIz注射后28d,模型組pERK蛋白表達量高于對照組(P<0.05),AGM450組、AGM300組、GP組大鼠脊髓pRK表達量均低于模型組(P<0.05或<0.01)。
結論：AGM具有明顯地調節血糖及鎮痛效應,其鎮痛機制可能與其對血糖的調節及抑制脊髓ERK蛋臼的活化有關
關鍵詞:糖尿病神經病理性疼痛:胍丁胺;加巴曠丁;血糖:鎮痛作用;細胞外調節蛋白激酶∷大鼠
糖尿病神經病理性疼痛(DNP)是指由糖尿病誘發的外周及中樞神經病變所致的頑固性疼痛,嚴重影響患者的生活質量。目前DNP治療藥物主要有醛糖還原酶抑制劑、血管擴張劑、神經營養劑、自由基清除劑等,臨床應用結果顯示以上藥物對患者肢端麻木的改善效果較好,但對減輕疼痛效果不明顯。作為二線治療的阿片類藥物或非甾體類抗炎藥,雖然具有良好的鎮痛活性,但多伴有較嚴重的不良反應并易導致嚴重的軀體或心理依賴。因此,DNP的治療已成為世界疼痛領域面臨的一大難題,尋找新的安全有效的治療藥物迫在眉睫。胍丁胺(AGM)是精氨酸在左旋精氨酸脫羧酶(LADC)催化下脫羧基而成的一種內源性生物活性物質,對炎性疼痛或慢性神經源性疼痛都有
定的鎮痛效應。然而,有關AGM治療DNP的效果及作用機制的報道鮮見。2018年3~8月,我們采用鏈脲佐菌素(STZ)構建DNP大鼠模型,以經典神經病理性疼痛治療藥加巴噴丁(GP)為陽性對照,通過觀察其行為學和脊髓組織中磷酸化細胞外調節蛋白激酶(pRK)表達變化,探索AGM的鎮痛機制,旨在為DNP的臨床治療提供安全有效的新型治療藥物奠定理論支持。
1材料與方法
1.1主要材料：SPF級SD雄性大鼠,體質量180-200g,由湖南斯萊克景達實驗動物有限公司提供,動物許可證號SCXK(湘)20160002,所有操作符合動物倫理委員會的要求。STZ(批號S0130)、AGM(批號A7127)均購自美國 Sigma公司,加巴噴丁(批號G122413)購自上海阿拉丁生化科技股份有限公司;ERK1/2及p玊RK12兔抗大鼠多克隆抗體購自南京巴傲得生物科技有限公司,辣根過氧化物酶標記的羊抗兔二抗購自武漢博士德公司,蛋白提取試劑盒、ECL增強化學發光試劑盒和BCA蛋白定量檢測試劑盒均購自美國 Thermo公司; Imark酶標儀、 Trans-lotl703920蛋白電泳儀均購自美國BioRad公司, Alpha ImagerHP凝膠成像系統購自美國Alpha公司YS22A型足底觸痛儀購自北京眾實迪創科技發展有限責任公司。
1.2實驗方法
1.2.1DNP模型構建
大鼠在自然光線,自由攝食、飲水條件下適應性喂養7d。進行基礎閾值檢測,剔除先天對痛覺不敏感的大鼠。大鼠夜間禁食不禁水12h后,單次腹腔注射新鮮配制SⅣZ溶液6540mg/kg;于注射后72h,測量尾靜脈空腹血糖,隨機鼠模型成功。于注射14d后,測定糖尿病大鼠機械縮足閾值(MWT)、熱縮足潛伏期(TWL),降低幅度>20%基礎閾值視為DNP模型制備成功。
1.2.2動物分組及藥物干預
取32只DNP模型大鼠,釆用隨機數字表法分為4組各8只。注射STZ后第15天起,AGM150、AGM-300組分別腹腔注射AGM150、300mg/kg,GP組腹腔注射GP100mg/kg,模型組腹腔注射等量生理鹽水;另取8只正常小鼠作為對照組,腹腔注射等量生理鹽水。各組均腹腔注射1次/d,連續14d。1.2.3大鼠血糖測定分別于STZ注射前1d(0-d),SⅣZ注射后7、14、21、28d,取尾靜脈血,用三諾安穩型血糖儀測定空腹血糖
1.2.4大鼠疼痛行為學檢查
分別于STZ注射前1d(0d),STZ注射后7、14、21、28d,測量MWT和TWL等疼痛行為學指標,測定時間均于每日9:00~16:00完成。維持室溫25℃左右,將大鼠置于足底觸痛儀實驗箱中適應30min后即可開始進行測量。按照激光定位大鼠后肢足底掌心,視頻屏幕協助定位;用足底觸痛儀記錄底部針頭或熱觸頭從上升至接觸大鼠足底到引起大鼠足部挪開刺激位置的力(即為MWT)或時間(即為TWL),讀數精確至0.1N或0.1s;重復3次,取平均值作為統計數據,每次測量間隔時間不少于3min。為避免損傷動物,選取的最大測試壓力為55N、觸發溫度為35℃。
1.2.5大鼠脊髓組織pRK蛋白檢測采用
Western blotting法。行為學檢查后,冰上迅速斷頭處死大鼠,快速剪取脊髓L~L。節段;加入細胞裂解液后置于勻漿器中充分勻漿,冰上裂解30min后轉至1.5mL離心管;4℃下以12000r/min離心15min,取上清液。BCA法測定樣本蛋白濃度后,按1:4加入5×上樣緩沖液,煮沸變性5min后-20℃C保存。將樣本蛋白在10% SDS-PGE凝膠系統中上樣電泳,采用濃縮膠電壓80V,分離膠電壓120V電泳。電泳完成后裁取所需分子量的凝膠,濕轉法將目的蛋白轉移至PVDF膜上,5%脫脂牛奶封閉1h加入兔源pRK一抗(1:1000),4℃孵育過夜,洗滌液漂洗濾膜3次,每次10min;加入辣根過氧化物酶標記山羊抗兔二抗(1:5000)室溫搖床孵育1h,Washing buffer漂洗3次,每次l0min。凝膠成像儀血糖濃度≥16.7mmol/L且穩定認為制備糖尿病大
曝光成像,用 Image j圖像分析軟件對目標條帶進行軟件。計量資料以x±s表示,多組間比較行單因素測定。曝光結束后,膜再生液洗脫pERK抗體;將方差分析( One Way ANOVA)。P<0.05為差異具PVDF膜與兔源ERK(1:1000)一抗孵育,再按前述有統計學意義方法操作后曝光成像。以pERK與總ERK蛋白條2結果帶灰度值的比值來表示PERK的表達變化水平
1.3統計學方法采用 Graphpad Prism6.0統計2.2各組大鼠MWT、TWL比較見表2、表3。
2.1各組大鼠血糖水平比較見表1。
2.3各組大鼠脊髓P玊RK表達比較與對照組大閾值,證明DNP大鼠模型制備成功。鼠脊髓p玊RK表達量(2460.55±10.41)比較,模型組pERK蛋白表達量(4431.22±434.78)增加的神經遞質/調質,參與多種疾病的病理過程,具有(P<0.05);與模型組比較,AGM150組(2422.35神經細胞保護、鎮痛,促細胞增殖,預防和治療阿片±145.42)、AGM30組(3375.4±304.38)、GP組所致軀體、精神依賴和復吸等重要藥理作用,有良好(2761.19±37.71)大鼠脊髓pRK表達量均降的開發前景及應用價值。內源性AGM可能通過激低(P<0.05或<0.01)。
3討論
DNP的發病機制十分復雜,目前尚缺乏確切的醋酸扭體實驗中,外源性給予AGM可以觀察到明病因學解釋。約87%的糖尿病患者長期承受著神顯的鎮痛活性。蘭忠平等采用蜜蜂毒新型炎經病變所致的慢性疼痛,治療上主要依賴于改善患性痛模型,鞘內同時注射AGM與嗎啡可發揮協同者血糖水平及促進外周神經損傷的修復。由于鎮痛作用。坐骨神經結扎大鼠海馬內注射AGM(1疼痛是一種不愉快的主觀情感體驗,只能將疼痛閾值作為疼痛的評估標準。研究表明,腹腔注射SⅣZ可能與海馬σ受體調節腫瘤壞死因子α(TNFα)表可引起機械痛覺過敏和觸覺異常性疼痛凹。本研達減少有關間。本研究結果表明,AGM(150、300究采用單次腹腔注射SⅣZ65mg/kg制備糖尿病大mg/kg)能顯著提高DNP大鼠的MWT、延長TWL,鼠模型,利用MWT、TWL作為疼痛指標,造模后大且AGM300mg/kg作用效果與GP相當,證明AGM鼠MWT、TWL均明顯下降,且降低幅度>20%基礎能減輕糖尿病大鼠神經病理性疼痛。本硏究中AGM對DNP大鼠TWL的延長效果沒有MWT增高的明顯,可能與儀器探頭接觸大鼠足部肉墊有關。
除了對大鼠行為學上的影響,本研究發現AGM(150、300mg/kg)均可降低DNP大鼠血糖水平,與Moldering等的研究結論一致。Ii等研究發現,在細胞水平上,AGM對SZ誘導的胰島β細胞損傷具有抑制作用,可能與其激活咪唑啉受體I3亞型有關。這提示AGM可能通過激活咪唑啉受體,降低血糖水平來延緩DNP進程,改善DNP癥狀。ERK家族有5個亞族,其中ERK1/2通過級聯信號將細胞外刺激傳遞至細胞核、磷酸化轉錄因子,可調節細胞功能,參與細胞增殖、分化、存活、死亡等神經細胞重要功能的調控,在疼痛及痛覺過敏信號傳導過程中起重要作用。ERKl/2的磷酸化含量可反映多種刺激誘發的神經細胞的快速變化,是一種新型神經細胞活動的功能指標。在多種病理性疼痛模型中,均發現ERK信號通路參與了脊髓水平傷害性信號調節和中樞敏感化的形成"。傷害性刺激使脊髓背角或背根神經節神經細胞ERK發生磷酸化,磷酸化的ERK一方面通過磷酸化神經細胞膜離子通道或受體,調節神經細胞的興奮性;另一方面激活核內轉錄因子調節傷害性刺激引起的靶基因表達,介導疼痛及痛覺敏化信號轉導。Han等2研究發現,在大鼠坐骨神經慢性壓迫性損傷(CCⅠ)模型中,脊髓背角pERK水平顯著上調;早期鞘內注射促分裂原活化蛋白激酶激酶(MEK)抑制劑U0126,可有效阻斷和延遲CCⅠ誘導的機械性異常性疼痛和熱痛覺過敏。秦曉輝等研究結果表明,AGM對甲醛所致大鼠疼痛反應有明顯的鎮痛作用;并且,在甲醛致痛前預先給予AGM160mg/kg,能明顯抑制甲醛所致脊髓背角磷酸化ERK表達量的上調。以上研究提示,ERK信號通路可能在DNP中同樣起到了至關重要的作用。本實驗結果表明,AGM(150、300mg/kg)可降低DNP大鼠脊髓ERK磷酸化水平。這提示AGM對DNP大鼠的鎮痛機制可能與抑制脊髓p￡RK的激活,減少脊髓內傷害性信號傳導有關AGM為中國人民解放軍軍事醫學科學院毒物藥物研究所承擔的重大新藥創制課題在研項目,目前尚未在國內上市,故而國內未有相關臨床應用報道。在國外,已有研究表明高劑量硫酸胍丁胺方案(2.670g/d)可連續安全食用長達5年,且在整個研究期間未出現不良反應。研究表明,在膳食中添加AGM可用于緩解腰椎間盤相關神經根病的疼痛,改善生活質量。綜上所述,本研究基于大鼠DNP模型,揭示了AGM具有明顯地調節血糖及鎮痛效應,其鎮痛機制化有關,為其臨床應用奠定了一定的理論基礎。
參考文獻
Ll] Schreiber AK, Nones CF, Reis RC, et al. Diabetic neuropathic pain: physiopathology and treatment [J]. World J Diabetes, 2015 6(3):3244
2] Malcangio M, Tomlinson DR. A pharmacologic analysis of mechanical hyperalgesia in streptozotocin/ diabetic rats L].Pain,1998
3 Li F, Wu N, Su R, et al. Imidazoline receptor antisera-selected Nischarin regulates the effect of agmatine on the development of orphine dependence [n. Addict Biol, 2012, 17(2): 392-408
4] Li J, Li X, Pei G, et al. Analgesic effect of agmatine and itsehancement on morphine analgesia in mice and rats [].ActaPharmacol sin,199,20(1):8185
5]蘭忠平,陳雅慧,顧楠,等.脊髓水平給予胍丁胺對鞘內嗎啡鎮痛的影響.中國應用生理學雜志,2014,30(3):197-98
6 Kotagale NR, Shirbhate SH, Shukla P, et al. Agmatine attenuates neuropathic pain in sciatic nerve ligated rats: Modulation by hippocampal sigma receptors LJ]. Eur J Pharmacol, 2013, 714(1-3)424-431
[] Molderings GJ, HaenischB. Agmatine decarboxylated L-arginine).physiological role and therapeutic potential [J. Pharmacol Ther,2012,133(3):351-365
8] Li Y, Cheng KC, Asakawa A, et al. Activation of imidazoline-H3receptors ameliorates pancreatic damage []. Clin Exp Pharmacol Physiol,2015,42(9):964971
9] Pan B, Zhong P, Sun D, et al. Extracellular signal-regulated kinase signaling in the ventral tegmental area mediates cocaine-induced synaptic plasticity and rewarding effects [J]. JNeuro-science,20l1,31(31):1124411255 L1oJ Xu X, Chen H, Ling BY, et al. Extracellular signal-regulated protein kinase activation in spinal cord contributes to pain hypersenstivity in a mouse model of type 2 diabetes [J]. Neurosci Bull 2014,30(1):5366Lll White JP, Cibelli M, Fidalgo AR, et al. Extracellular signal-regulated kinases in pain of peripheral origin LJI. Eur J Pha 2011,650(1):817
[12] Han M, Huang RY, Du YM, et al. Early intervention of ERK activation in the spinal cord can block initiation of peripheral nerveinjury-induced neuropathic pain in rats []. Acta Physiologica Sinica,2011,63(2):106114
13]秦曉輝,吳寧,蘇瑞斌,等.胍丁胺抑制炎性疼痛誘導脊髓磷酸化細胞外信號調節激酶表達上調D].中國臨床藥理學與治療學,2007,12(9):101841022
14] Gilad GM, Gilad VH. Long-term (5 years), high daily dosage of dietary agmatine-evidence of safety a case report [J].JMedFood,2014,17(11):12564259
15.Keynan O, Mirovsky Y, Dekel S, et al. Safety and efficacy of diet-ary agmatine sulfate in lumbar dise-associated radiculopathy. an open -abel, dose-escalating study followed by a randomized, doub le-blind, placebo-eontrolled trial [J]. Pain Med, 2010, 11(3)
摘要：
目的：觀寮胍丁胺(AGM)對糖尿病神經病理性疼痛(ⅠNP)模型大鼠的干預效應,并探討其可能的機制。
方法：將40只雄性SD大鼠隨機分為5組各8只,除對照組外其余各組單次腹腔注射鏈脲佐菌素65mg/kg構建糖尿病模型;足底觸痛伩測量糖尿病大鼠杋械縮足閾偵(\wT)和熱縮足潛伏期(Tw),降嘔〉20%基礎閾值視為DNP大鼠模型制爺成功。ACM50組、ACM300組、GP組分別腹腔注射AGM150、300mg/kg和加巴噴丁100mg/g,對照組、模型組腹腔注射等量生理鹽水。分別于STZ注射前1d(0d),SYZ注射后7、14、21、28d,取尾靜脈血檢測血糖,爛底觸痛儀測量MWT、TWL:檢査后處死大鼠取脊髓組織,釆用 Western blotting法檢測磷酸化細胞外調節蛋白激酶活性。結果與對照組比較,其他各組血糖均升高,MWT降低、TW.縮短(P均<0.01)。與模型組比較,AGM150組、AGⅥ300組于STZ注射后21、28d血糖降低(P<0.05或<0.01),GP組血糖差異無統計學意義:AGM150組、AGM300組MwT(21、28d)升高、TW.(28d)延長(P均<0.01),GP組21、28d時MWT升高TWL延長(P<0.05或<0.01);于SIz注射后28d,模型組pERK蛋白表達量高于對照組(P<0.05),AGM450組、AGM300組、GP組大鼠脊髓pRK表達量均低于模型組(P<0.05或<0.01)。
結論：AGM具有明顯地調節血糖及鎮痛效應,其鎮痛機制可能與其對血糖的調節及抑制脊髓ERK蛋臼的活化有關
關鍵詞:糖尿病神經病理性疼痛:胍丁胺;加巴曠丁;血糖:鎮痛作用;細胞外調節蛋白激酶∷大鼠
糖尿病神經病理性疼痛(DNP)是指由糖尿病誘發的外周及中樞神經病變所致的頑固性疼痛,嚴重影響患者的生活質量。目前DNP治療藥物主要有醛糖還原酶抑制劑、血管擴張劑、神經營養劑、自由基清除劑等,臨床應用結果顯示以上藥物對患者肢端麻木的改善效果較好,但對減輕疼痛效果不明顯。作為二線治療的阿片類藥物或非甾體類抗炎藥,雖然具有良好的鎮痛活性,但多伴有較嚴重的不良反應并易導致嚴重的軀體或心理依賴。因此,DNP的治療已成為世界疼痛領域面臨的一大難題,尋找新的安全有效的治療藥物迫在眉睫。胍丁胺(AGM)是精氨酸在左旋精氨酸脫羧酶(LADC)催化下脫羧基而成的一種內源性生物活性物質,對炎性疼痛或慢性神經源性疼痛都有
定的鎮痛效應。然而,有關AGM治療DNP的效果及作用機制的報道鮮見。2018年3~8月,我們采用鏈脲佐菌素(STZ)構建DNP大鼠模型,以經典神經病理性疼痛治療藥加巴噴丁(GP)為陽性對照,通過觀察其行為學和脊髓組織中磷酸化細胞外調節蛋白激酶(pRK)表達變化,探索AGM的鎮痛機制,旨在為DNP的臨床治療提供安全有效的新型治療藥物奠定理論支持。
1材料與方法
1.1主要材料：SPF級SD雄性大鼠,體質量180-200g,由湖南斯萊克景達實驗動物有限公司提供,動物許可證號SCXK(湘)20160002,所有操作符合動物倫理委員會的要求。STZ(批號S0130)、AGM(批號A7127)均購自美國 Sigma公司,加巴噴丁(批號G122413)購自上海阿拉丁生化科技股份有限公司;ERK1/2及p玊RK12兔抗大鼠多克隆抗體購自南京巴傲得生物科技有限公司,辣根過氧化物酶標記的羊抗兔二抗購自武漢博士德公司,蛋白提取試劑盒、ECL增強化學發光試劑盒和BCA蛋白定量檢測試劑盒均購自美國 Thermo公司; Imark酶標儀、 Trans-lotl703920蛋白電泳儀均購自美國BioRad公司, Alpha ImagerHP凝膠成像系統購自美國Alpha公司YS22A型足底觸痛儀購自北京眾實迪創科技發展有限責任公司。
1.2實驗方法
1.2.1DNP模型構建
大鼠在自然光線,自由攝食、飲水條件下適應性喂養7d。進行基礎閾值檢測,剔除先天對痛覺不敏感的大鼠。大鼠夜間禁食不禁水12h后,單次腹腔注射新鮮配制SⅣZ溶液6540mg/kg;于注射后72h,測量尾靜脈空腹血糖,隨機鼠模型成功。于注射14d后,測定糖尿病大鼠機械縮足閾值(MWT)、熱縮足潛伏期(TWL),降低幅度>20%基礎閾值視為DNP模型制備成功。
1.2.2動物分組及藥物干預
取32只DNP模型大鼠,釆用隨機數字表法分為4組各8只。注射STZ后第15天起,AGM150、AGM-300組分別腹腔注射AGM150、300mg/kg,GP組腹腔注射GP100mg/kg,模型組腹腔注射等量生理鹽水;另取8只正常小鼠作為對照組,腹腔注射等量生理鹽水。各組均腹腔注射1次/d,連續14d。1.2.3大鼠血糖測定分別于STZ注射前1d(0-d),SⅣZ注射后7、14、21、28d,取尾靜脈血,用三諾安穩型血糖儀測定空腹血糖
1.2.4大鼠疼痛行為學檢查
分別于STZ注射前1d(0d),STZ注射后7、14、21、28d,測量MWT和TWL等疼痛行為學指標,測定時間均于每日9:00~16:00完成。維持室溫25℃左右,將大鼠置于足底觸痛儀實驗箱中適應30min后即可開始進行測量。按照激光定位大鼠后肢足底掌心,視頻屏幕協助定位;用足底觸痛儀記錄底部針頭或熱觸頭從上升至接觸大鼠足底到引起大鼠足部挪開刺激位置的力(即為MWT)或時間(即為TWL),讀數精確至0.1N或0.1s;重復3次,取平均值作為統計數據,每次測量間隔時間不少于3min。為避免損傷動物,選取的最大測試壓力為55N、觸發溫度為35℃。
1.2.5大鼠脊髓組織pRK蛋白檢測采用
Western blotting法。行為學檢查后,冰上迅速斷頭處死大鼠,快速剪取脊髓L~L。節段;加入細胞裂解液后置于勻漿器中充分勻漿,冰上裂解30min后轉至1.5mL離心管;4℃下以12000r/min離心15min,取上清液。BCA法測定樣本蛋白濃度后,按1:4加入5×上樣緩沖液,煮沸變性5min后-20℃C保存。將樣本蛋白在10% SDS-PGE凝膠系統中上樣電泳,采用濃縮膠電壓80V,分離膠電壓120V電泳。電泳完成后裁取所需分子量的凝膠,濕轉法將目的蛋白轉移至PVDF膜上,5%脫脂牛奶封閉1h加入兔源pRK一抗(1:1000),4℃孵育過夜,洗滌液漂洗濾膜3次,每次10min;加入辣根過氧化物酶標記山羊抗兔二抗(1:5000)室溫搖床孵育1h,Washing buffer漂洗3次,每次l0min。凝膠成像儀血糖濃度≥16.7mmol/L且穩定認為制備糖尿病大
曝光成像,用 Image j圖像分析軟件對目標條帶進行軟件。計量資料以x±s表示,多組間比較行單因素測定。曝光結束后,膜再生液洗脫pERK抗體;將方差分析( One Way ANOVA)。P<0.05為差異具PVDF膜與兔源ERK(1:1000)一抗孵育,再按前述有統計學意義方法操作后曝光成像。以pERK與總ERK蛋白條2結果帶灰度值的比值來表示PERK的表達變化水平
1.3統計學方法采用 Graphpad Prism6.0統計2.2各組大鼠MWT、TWL比較見表2、表3。
2.3各組大鼠脊髓P玊RK表達比較與對照組大閾值,證明DNP大鼠模型制備成功。鼠脊髓p玊RK表達量(2460.55±10.41)比較,模型組pERK蛋白表達量(4431.22±434.78)增加的神經遞質/調質,參與多種疾病的病理過程,具有(P<0.05);與模型組比較,AGM150組(2422.35神經細胞保護、鎮痛,促細胞增殖,預防和治療阿片±145.42)、AGM30組(3375.4±304.38)、GP組所致軀體、精神依賴和復吸等重要藥理作用,有良好(2761.19±37.71)大鼠脊髓pRK表達量均降的開發前景及應用價值。內源性AGM可能通過激低(P<0.05或<0.01)。
3討論
DNP的發病機制十分復雜,目前尚缺乏確切的醋酸扭體實驗中,外源性給予AGM可以觀察到明病因學解釋。約87%的糖尿病患者長期承受著神顯的鎮痛活性。蘭忠平等采用蜜蜂毒新型炎經病變所致的慢性疼痛,治療上主要依賴于改善患性痛模型,鞘內同時注射AGM與嗎啡可發揮協同者血糖水平及促進外周神經損傷的修復。由于鎮痛作用。坐骨神經結扎大鼠海馬內注射AGM(1疼痛是一種不愉快的主觀情感體驗,只能將疼痛閾值作為疼痛的評估標準。研究表明,腹腔注射SⅣZ可能與海馬σ受體調節腫瘤壞死因子α(TNFα)表可引起機械痛覺過敏和觸覺異常性疼痛凹。本研達減少有關間。本研究結果表明,AGM(150、300究采用單次腹腔注射SⅣZ65mg/kg制備糖尿病大mg/kg)能顯著提高DNP大鼠的MWT、延長TWL,鼠模型,利用MWT、TWL作為疼痛指標,造模后大且AGM300mg/kg作用效果與GP相當,證明AGM鼠MWT、TWL均明顯下降,且降低幅度>20%基礎能減輕糖尿病大鼠神經病理性疼痛。本硏究中AGM對DNP大鼠TWL的延長效果沒有MWT增高的明顯,可能與儀器探頭接觸大鼠足部肉墊有關。
除了對大鼠行為學上的影響,本研究發現AGM(150、300mg/kg)均可降低DNP大鼠血糖水平,與Moldering等的研究結論一致。Ii等研究發現,在細胞水平上,AGM對SZ誘導的胰島β細胞損傷具有抑制作用,可能與其激活咪唑啉受體I3亞型有關。這提示AGM可能通過激活咪唑啉受體,降低血糖水平來延緩DNP進程,改善DNP癥狀。ERK家族有5個亞族,其中ERK1/2通過級聯信號將細胞外刺激傳遞至細胞核、磷酸化轉錄因子,可調節細胞功能,參與細胞增殖、分化、存活、死亡等神經細胞重要功能的調控,在疼痛及痛覺過敏信號傳導過程中起重要作用。ERKl/2的磷酸化含量可反映多種刺激誘發的神經細胞的快速變化,是一種新型神經細胞活動的功能指標。在多種病理性疼痛模型中,均發現ERK信號通路參與了脊髓水平傷害性信號調節和中樞敏感化的形成"。傷害性刺激使脊髓背角或背根神經節神經細胞ERK發生磷酸化,磷酸化的ERK一方面通過磷酸化神經細胞膜離子通道或受體,調節神經細胞的興奮性;另一方面激活核內轉錄因子調節傷害性刺激引起的靶基因表達,介導疼痛及痛覺敏化信號轉導。Han等2研究發現,在大鼠坐骨神經慢性壓迫性損傷(CCⅠ)模型中,脊髓背角pERK水平顯著上調;早期鞘內注射促分裂原活化蛋白激酶激酶(MEK)抑制劑U0126,可有效阻斷和延遲CCⅠ誘導的機械性異常性疼痛和熱痛覺過敏。秦曉輝等研究結果表明,AGM對甲醛所致大鼠疼痛反應有明顯的鎮痛作用;并且,在甲醛致痛前預先給予AGM160mg/kg,能明顯抑制甲醛所致脊髓背角磷酸化ERK表達量的上調。以上研究提示,ERK信號通路可能在DNP中同樣起到了至關重要的作用。本實驗結果表明,AGM(150、300mg/kg)可降低DNP大鼠脊髓ERK磷酸化水平。這提示AGM對DNP大鼠的鎮痛機制可能與抑制脊髓p￡RK的激活,減少脊髓內傷害性信號傳導有關AGM為中國人民解放軍軍事醫學科學院毒物藥物研究所承擔的重大新藥創制課題在研項目,目前尚未在國內上市,故而國內未有相關臨床應用報道。在國外,已有研究表明高劑量硫酸胍丁胺方案(2.670g/d)可連續安全食用長達5年,且在整個研究期間未出現不良反應。研究表明,在膳食中添加AGM可用于緩解腰椎間盤相關神經根病的疼痛,改善生活質量。綜上所述,本研究基于大鼠DNP模型,揭示了AGM具有明顯地調節血糖及鎮痛效應,其鎮痛機制化有關,為其臨床應用奠定了一定的理論基礎。
參考文獻
Ll] Schreiber AK, Nones CF, Reis RC, et al. Diabetic neuropathic pain: physiopathology and treatment [J]. World J Diabetes, 2015 6(3):3244
2] Malcangio M, Tomlinson DR. A pharmacologic analysis of mechanical hyperalgesia in streptozotocin/ diabetic rats L].Pain,1998
3 Li F, Wu N, Su R, et al. Imidazoline receptor antisera-selected Nischarin regulates the effect of agmatine on the development of orphine dependence [n. Addict Biol, 2012, 17(2): 392-408
4] Li J, Li X, Pei G, et al. Analgesic effect of agmatine and itsehancement on morphine analgesia in mice and rats [].ActaPharmacol sin,199,20(1):8185
5]蘭忠平,陳雅慧,顧楠,等.脊髓水平給予胍丁胺對鞘內嗎啡鎮痛的影響.中國應用生理學雜志,2014,30(3):197-98
6 Kotagale NR, Shirbhate SH, Shukla P, et al. Agmatine attenuates neuropathic pain in sciatic nerve ligated rats: Modulation by hippocampal sigma receptors LJ]. Eur J Pharmacol, 2013, 714(1-3)424-431
[] Molderings GJ, HaenischB. Agmatine decarboxylated L-arginine).physiological role and therapeutic potential [J. Pharmacol Ther,2012,133(3):351-365
8] Li Y, Cheng KC, Asakawa A, et al. Activation of imidazoline-H3receptors ameliorates pancreatic damage []. Clin Exp Pharmacol Physiol,2015,42(9):964971
9] Pan B, Zhong P, Sun D, et al. Extracellular signal-regulated kinase signaling in the ventral tegmental area mediates cocaine-induced synaptic plasticity and rewarding effects [J]. JNeuro-science,20l1,31(31):1124411255 L1oJ Xu X, Chen H, Ling BY, et al. Extracellular signal-regulated protein kinase activation in spinal cord contributes to pain hypersenstivity in a mouse model of type 2 diabetes [J]. Neurosci Bull 2014,30(1):5366Lll White JP, Cibelli M, Fidalgo AR, et al. Extracellular signal-regulated kinases in pain of peripheral origin LJI. Eur J Pha 2011,650(1):817
[12] Han M, Huang RY, Du YM, et al. Early intervention of ERK activation in the spinal cord can block initiation of peripheral nerveinjury-induced neuropathic pain in rats []. Acta Physiologica Sinica,2011,63(2):106114
13]秦曉輝,吳寧,蘇瑞斌,等.胍丁胺抑制炎性疼痛誘導脊髓磷酸化細胞外信號調節激酶表達上調D].中國臨床藥理學與治療學,2007,12(9):101841022
14] Gilad GM, Gilad VH. Long-term (5 years), high daily dosage of dietary agmatine-evidence of safety a case report [J].JMedFood,2014,17(11):12564259
15.Keynan O, Mirovsky Y, Dekel S, et al. Safety and efficacy of diet-ary agmatine sulfate in lumbar dise-associated radiculopathy. an open -abel, dose-escalating study followed by a randomized, doub le-blind, placebo-eontrolled trial [J]. Pain Med, 2010, 11(3)
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