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如何確定數(shù)字PCR的LOB?

瀏覽次數(shù):4100 發(fā)布日期:2019-5-27  來(lái)源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)
數(shù)字PCR技術(shù)是一項(xiàng)新的核酸檢測(cè)和定量技術(shù)。空白檢測(cè)限LOB (Limit of Blank)是判斷數(shù)字PCR技術(shù)檢測(cè)能力的重要參數(shù)。
LOB(the limit of blank)是一項(xiàng)統(tǒng)計(jì)學(xué)實(shí)驗(yàn)參數(shù)。在可信度大于95%的概率下,對(duì)于不含有分析物的樣品(空白樣品),LOB是可能觀察到的最高檢測(cè)結(jié)果。換句話(huà)說(shuō)就是最大的假陽(yáng)性數(shù)。
為什么要在數(shù)字PCR中計(jì)算LOB ?
在數(shù)字PCR (dPCR)中,多種因素可以引起假陽(yáng)性。定量核酸時(shí)確定假陽(yáng)性的cutoff對(duì)dPCR檢測(cè)的穩(wěn)定性至關(guān)重要。為了定義這個(gè)cutoff,檢測(cè)閾值通常設(shè)置在LOB值之上,而在檢測(cè)校準(zhǔn)期間必須首先為每個(gè)目標(biāo)確定空白LOB值。此外,實(shí)驗(yàn)LOB值對(duì)于判斷反應(yīng)是正還是負(fù)以及計(jì)算LOD值都是必要的。
95%置信度LOB如下表所示:
R:重復(fù)次數(shù),一般≧30
μ和α:分別為假陽(yáng)性個(gè)數(shù)的平均值和標(biāo)準(zhǔn)方差
μcorr:校正平均值
當(dāng)μ=0(即假陽(yáng)性永遠(yuǎn)不會(huì)出現(xiàn)),則LOB(95%)=0
當(dāng)LOB為非零時(shí),可以用概率分布加權(quán)的“減去假陽(yáng)性”的方法來(lái)校正實(shí)驗(yàn)樣品中目標(biāo)核酸的量。
更多LOB值介紹可登陸Gene-π數(shù)字PCR學(xué)堂(www.cycloudbio.com數(shù)字PCR學(xué)堂快速入口)統(tǒng)計(jì)工具查看,您也可以選擇其他感興趣的應(yīng)用教程,其中包含從實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)到數(shù)據(jù)分析的詳細(xì)工作流程。 您還可以通過(guò)搜索導(dǎo)航工具直接搜索特定的項(xiàng)目("dPCR的DNA準(zhǔn)備","熒光溢出"等),或點(diǎn)擊我們的"HOW TO" 選擇您需要的部分(設(shè)計(jì)、分析、報(bào)告)。
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