人胃泌素 (Gastrin)ELISA 試劑盒準備試劑收集及注意事項
瀏覽次數:4979 發(fā)布日期:2019-5-24
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人胃泌素 (Gastrin)ELISA 試劑盒準備試劑與收集血樣
1. 收集標本:血清、血漿(EDTA 、檸檬酸鹽、肝素抗凝)、細胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測, 2-8 ℃ 保存48 小時;更長時間須冷凍( -20 ℃或 -70 ℃ )保存,避免反復凍融。
2. 標準品液配制:使用前加入1ml 蒸餾水 混勻,配成 4 0ng/ml 的溶液 。 設標準 管 8 管,管加標本稀釋液 900ul ,第二至第八管加入標本稀釋液 500ul 。在管中加入 4 0ng/ml 的標準品溶液 100ul 混勻后用加樣器吸出 500ul ,移至第二 管 。如此反復作對倍稀釋,從第七 管 中吸出 500ul 棄去。第八 管 為空白對照。
3. 10× 標本稀釋液用蒸餾水作 1: 1 0 倍稀釋( 示例: 1ml濃稀釋液 +9ml 蒸餾水)。
4. 洗滌液:用重蒸水 1:20 稀釋(示例:1ml 濃縮洗滌液加入 19ml 的重蒸水)
檢測程序
1. 加樣:每孔各加入標準品或待測樣品 100ul ,將反應板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。
2. 洗板:用洗滌液將反應板充分洗滌 4-6 次,向濾紙上印干。
3. 每孔中加入抗體工作液10 0ul 。將反應板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。
4. 洗板:同前。
5. 每孔加酶標抗體工作液100ul 。將反應板置 37 ℃ 3 0 分鐘。
6. 洗板:同前。
7. 每孔加入底物工作液100ul ,置 37 ℃ 暗處反應15 分鐘。
8. 每孔加入100ul 終止液混勻。
9. 30分鐘內用酶標儀在 45 0 nm 處測 吸光值。
結果計算與判斷
1. 所有 OD 值都應減除空白值后再行計算。
2. 以標準品4000 、 20 00 、100 0 、500 、 250 、 125 、 62.5 、 0 pg /ml 為橫坐標, OD 值為縱坐標,在坐標紙上作圖,畫出標準曲線。
3. 根據樣品 OD 值在該曲線圖上查出相應 Gastrin 含量。
試劑盒性能
1. 靈敏度 : *小的Gastrin 檢測濃度小于 30 pg/ml。
2. 特異性: 可同時檢測重組或天然的人 Gastrin 。 不與 人其它細胞因子有交叉反應。
3. 重復性:板內、板見變異系數均小于10%。
注意事項
1. 以上標準孔及待 測 樣品均建議做復孔,每次測定應同時 做 標準曲線。
2. 洗滌過程 很關鍵。洗滌不充分將導致精確度誤差及 OD 值錯誤地升高。
3. 板條開封后剩余板條要再封好,保持 板條干燥 。
4. 本試劑盒宜置 4 o C冰箱保存。
5. 本試劑盒僅用于科研,不能用于臨床診斷!