免疫熒光技術（Immunofluorescence technique）又稱熒光抗體技術，是標記免疫技術中發展最早的一種。它是在免疫學、生物化學和顯微鏡技術的基礎上建立起來的一項技術。很早以來就有一些學者試圖將抗體分子與一些示蹤物質結合，利用抗原抗體反應進行組織或細胞內抗原物質的定位。
一．傳統的免疫熒光實驗步驟
（一）、實驗材料 
1. 細胞樣品 
2. 試劑、試劑盒： 多聚甲Quan；70% 甲醇；丙Tong；PBS；Triton ；BSA；DAPI 染液；DABCO；Tris；甘油   
3. 儀器、耗材：玻片     

（二）、實驗步驟     
細胞爬片免疫熒光實驗步驟 
第一天：
1. 在培養板中將已爬好細胞的玻片用 PBS 浸洗 3 次，每次 3 min；

2. 用 4% 的多聚甲Quan固定爬片 15 min， PBS 浸洗玻片 3 次，每次 3 min；
3. 0.5%Triton X-100( PBS 配制 ) 室溫通透 20 min（細胞膜上表達的抗原省略此步驟）；

4. PBS 浸洗玻片 3 次，每次 3 min，吸水紙吸干 PBS，在玻片上滴加正常山羊血清，室溫封閉 30 min；

5. 吸水紙吸掉封閉液，不洗，每張玻片滴加足夠量的稀釋好的一抗并放入濕盒，4℃ 孵育過夜；

第二天：

6. 加熒光二抗： PBST 浸洗爬片 3 次，每次 3 min，吸水紙吸干爬片上多余液體后滴加稀釋好的熒光二抗，濕盒中 20-37℃ 孵育 1 h，PBST 浸洗切片 3 次，每次 3 min；注意：從加熒光二抗起，后面所有操作步驟都盡量在較暗處進行。

7. 復染核：滴加 DAPI 避光孵育 5 min，對標本進行染核，PBST 5 min×4 次洗去多余的 DAPI；

8. 用吸水紙吸干爬片上的液體，用含抗熒光淬滅劑的封片液封片，然后在熒光顯微鏡下觀察采集圖像

二 傳統免疫熒光實驗主要問題

1. 爬片效果欠佳
2. 細胞和試劑用量大，成本高
3. 染液分布不均
4. 操作繁瑣,費時費力

三. 一體化免疫熒光技術簡介 
一體化的培養室-固定-染色-成像 免疫熒光的解決方案

技術特點：
1.快速簡便的樣品制備,一體化培養室簡化了免疫熒光染色方案
2.均勻細胞分布,通道載玻片幾何結構可以產生均勻的細胞分布
3.經濟實惠的實驗方案，需要少量的細胞和試劑
4.高分辨率成像，適用于寬場熒光，共焦成像，FRAP-FRET-FLIM和高質量的相差成像（Phase Contrast）
 
主要工作模式：
1. 通道模式：ibidi通道載玻片是使用少量試劑的理想選擇。μ-Slides VI0.4是一般免疫熒光檢測的理想選擇，而μ-Slide I0.4Luer可在低密度培養和流動實驗中進行免疫熒光染色。

2.開放腔室模式
Ibidi μ-Slide 8 孔和μ-Dish35mm 能夠在全內腔中實現標準免疫熒光方案，無蓋玻片。染色后，使用高分辨率顯微鏡通過聚合物蓋玻片底部觀察樣品。

3. 可拆卸腔室載玻片模式
帶有腔室的可拆卸硅墊片為個體細胞培養和孵育提供了理想的模式。ibidi micro-Insert 4 Well可以使用極低的試劑量。可拆卸3Well|8Well|12 Well Chambers是長期樣品儲存的理想選擇。

1. 一體化免疫熒光技術應用舉例

1. Human umbilical vein endothelial cells (HUVEC) cultured under flow conditions in μ-Slide I ^0.4 Luer

3. Differentiated mouse fibroblasts cultured on elastic surface (ESS 28 kPa)

綠色: zyxin (Alexa 488 conjugated antibody)
紅色: alpha-smooth muscle actin (Cy5 conjugated antibody)