LaVision 光片照明顯微鏡應用于炎癥性腸道疾病研究
LaVision BioTec Light-Sheet Microscopy光片照明顯微鏡
文獻簡述——Three-Dimensional Cross-Sectional Light-Sheet Microscopy Imaging of the Inflamed Mouse Gut
前言：
目前，一些炎癥性腸道疾�。↖BD），如克羅恩�。–D）或潰瘍性結腸炎（UC）等，其發病的確切機理仍然不清楚。然而，對于上述疾病的治療，近期已經有更多的治療方案可供選擇，并且一些新發現的化合物可能進一步改善IBD的治療方法。需要引起重視的是，如果沒有轉化研究，包括對小鼠模型的臨床前研究，這些新化合物的藥物開發是不可能的。在這類轉化研究中，病變組織的成像對于識別潛在靶點至關重要。然而，各種傳統成像技術的主要局限是樣本成像穿透深度有限、視野小、分辨率低，這樣會導致結果評價只選擇了很小一部分腸道組織，從而導致一些潛在結果誤判。光片熒光顯微鏡可以的克服這些缺點，已經成為了胃腸道疾病轉化醫學研究中的有力工具。
本研究使用了人源化小鼠模型，將CellTrace Yellow染色的人T細胞與AF647標記的鼠CD31抗體一起注射到大腸炎免疫缺陷小鼠回結腸動脈中。3小時后，處死小鼠，依次用含5mM EDTA的PBS灌注和含4% PFA的PBS灌注。腸管標本嵌入1%瓊脂糖，后置入4% PFA。按照標準流程進行透明化處理。
所有3D成像均由LaVision光片照明顯微鏡配合軟件Imaris完成。
LaVision光片顯微鏡的詳細介紹：http://qd-china.com/products2.aspx?id=434
結果圖像示例：
結果一，圖片詳細展示了LSFM對未經組織切片的小鼠內臟進行橫切面掃描成像并可以任何角度和平面進行觀察與分析，也可以生成視頻。
結果一，圖片詳細展示了LSFM對未經組織切片的小鼠內臟進行橫切面掃描成像并可以任何角度和平面進行觀察與分析，也可以生成視頻。
圖1所示。(A) LSFM獲取的3d重建圖像數據。人IBD T細胞呈綠色，鼠血管呈紅色，組織自發熒光呈灰色。(B) 混合（Blend）和最大強度投射(MIP)分別突出顯示了血管和轉移的細胞。(C) 高倍鏡下的回腸絨毛血管(紅色)和原發性IBD T細胞(綠色)。(D)LSFM的激光光片形成及光路圖。由LaVision Biotec提供。(E) 基于體積的細胞定量。
圖2所示。人源化小鼠T細胞體內轉運至炎癥腸道的歸巢模型分析。將源自UC患者的CD4+ T細胞按文中所示方法處理并注射至結腸炎免疫缺陷小鼠。在3個隨機位置上對歸巢細胞進行定量。
文中的圖像信息確切地表明，作為一種全新的橫截面3D成像技術，LSFM在轉化醫學研究中具有重要價值。通過本文證明了它可以用于分析炎癥人源化小鼠模型中IBD T細胞轉移。然而，除了這個應用方向，還有其他IBD相關或各種胃腸病學研究模型和問題可以使用這一技術來進一步拓展，可以更快、更好地獲取和展示光學信息。LSFM還可以擴展應用到所有關于血管生成、腫瘤擴散或浸潤、細胞追蹤和炎癥的問題。LSFM尤其適用于表達熒光蛋白的轉基因鼠。此外，LSFM很可能適用于活檢或手術中獲得的人體組織標本以進行IBD或癌癥免疫治療等領域的研究和診斷。綜上所述，LSFM的相關研究有潛力為轉化研究和患者護理方面的重大進展奠定基礎，促進現在以及未來的治療方法的發展。
文中的圖像信息確切地表明，作為一種全新的橫截面3D成像技術，LSFM在轉化醫學研究中具有重要價值。通過本文證明了它可以用于分析炎癥人源化小鼠模型中IBD T細胞轉移。然而，除了這個應用方向，還有其他IBD相關或各種胃腸病學研究模型和問題可以使用這一技術來進一步拓展，可以更快、更好地獲取和展示光學信息。LSFM還可以擴展應用到所有關于血管生成、腫瘤擴散或浸潤、細胞追蹤和炎癥的問題。LSFM尤其適用于表達熒光蛋白的轉基因鼠。此外，LSFM很可能適用于活檢或手術中獲得的人體組織標本以進行IBD或癌癥免疫治療等領域的研究和診斷。綜上所述，LSFM的相關研究有潛力為轉化研究和患者護理方面的重大進展奠定基礎，促進現在以及未來的治療方法的發展。
文章視頻信息截圖
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http://dx.doi.org/10.1053/j.gastro.2017.07.022
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