2×CTAB提取緩沖液說明書
2×CTAB提取緩沖液
● 產品編號及規格：
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貨號 |
名稱 |
規格 |
貯存 |
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RTG2405-01 |
2×CTAB提取緩沖液 |
200 ml |
RT |
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RTG2405-02 |
還原劑 |
1 ml |
RT |
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說明書 |
一份 |
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● 產品介紹：
CTAB (hexadecyltrimethylammonium bromide,十六烷基三甲基溴化銨)，是一種陽離子去污劑,具有從低離子強度溶液中沉淀核酸與酸性多聚糖的特性。在高離子強度的溶液中(>0.7mol/L NaCl) CTAB與蛋白質和多聚糖形成復合物而不沉淀核酸。通過有機溶劑抽提，去除蛋白、多糖、酚類等雜質后加入乙醇沉淀即可使核酸分離出來。
2×CTAB提取緩沖液成分：2%(w/v)CTAB，100mM Tris (pH 8.0)，20mM EDTA,1.4 MNaCl,，0.2%(v/v) 還原劑(隨用隨加) 。
● 儲存條件：
室溫貯存一年。加入還原劑后4℃貯存。
● 實驗操作步驟：
1. 2×即用型CTAB提取液配制：
按照終濃度0.2% （v/v）加入還原劑，如100ml 2×CTAB提取緩沖液中加入0.2 ml 還原劑。加入還原劑后的2×即用型CTAB提取液4℃貯存。
2. 取0.2-0.5克新鮮植物材料，于液氮中研磨成粉末。
3. 將粉末轉入預冷的1.5ml離心管中，立即加入0.7 ml 2×即用型CTAB提取緩沖液，65℃水浴30分鐘，間歇混勻。
4. 加入等體積的酚：氯仿：異戊醇(25:24:1)，輕緩顛倒離心管混勻8-10次，常溫12000 rpm 離心10分鐘。
5. 將上清液轉入另一1.5ml離心管中，加入等體積酚:氯仿:異戊醇(25:24:1)，顛倒離心管混勻8-10次，常溫12000 rpm離心10分鐘。
6. 將上層水相轉入新的1.5 ml離心管中，加入0.6倍體積的冰冷異丙醇，輕柔混勻，冰浴30分鐘。
7. 12000 rpm4℃ 離心10分鐘。
8. 去上清液, 加入1ml 70%乙醇漂洗沉淀，4℃12000 rpm 3分鐘，吸棄乙醇。
9.4℃ 12000 rpm 1分鐘，用移液器吸盡殘余乙醇，超凈臺吹干沉淀。
注：沉淀不能徹底干燥，否則不好溶解。
10. 加入30-50μl的超純水或TE緩沖液溶解DNA，-20℃保存備用。
