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非損傷微測技術應用于沙柳致病蛋白抑制植物耐鹽能力研究

瀏覽次數:4038 發布日期:2018-8-17  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負

致病相關(PR)蛋白參與植物防御,其具有多種功能適應性,有助于抵抗各種病原體、提高環境脅迫耐受性。沙柳是一種生長迅速的柳樹品種,可以耐受許多不利環境。

中國林科院亞熱帶林業研究所卓仁英研究員課題組在Environmental and Experimental Botany上發表了一篇文章,題目為“Pathogenesis-related protein PR10 from Salix matsudana Koidz exhibits resistance to salt stress in transgenic Arabidopsis thaliana”,主要探究PR蛋白在植物耐鹽機制中起到的作用。

前期的比較蛋白質組學分析表明:沙柳PR蛋白(SmPR10)較為豐富,經過100 mM NaCl處理后表達上調。本實驗以沙柳為材料,克隆并鑒定了SmPR10基因,以驗證其在耐鹽性中的作用。SmPR10的氨基酸序列與紫蘇柳和毛白楊的PR蛋白的序列同源性分別為98%和93%。SmPR10定位在擬南芥原生質體的胞質中,根的轉錄及蛋白水平較高,且100mM NaCl處理后表達上調。免疫定位分析發現,韌皮部纖維細胞和根木質部中特異性的檢測到SmPR10。而且,SmPR10的異質過表達提高了轉基因擬南芥的耐鹽性,具體表現在根長度、根數量、Na+流速、以及葉綠素含量、MDA含量、電導率等生理參數及SOD和POD酶活性水平。

擬南芥根部Na+流檢測圖

對照組、鹽脅迫組擬南芥根部Na+流結果。正值表示外排

其中,Na+流速利用基于非損傷微測技術(Non-invasive Micro-test Technology, NMT)的NMT活體生理檢測儀 Physiolyzer®進行檢測,發現正常條件下,轉基因組與野生對照組的Na+外排相似。但是,100mM NaCl處理后,轉基因組的Na+外排明顯增加。這說明:相比于野生型,SmPR10過表達幼苗根部的Na+外排能力更高,從而更加耐鹽。

1、工業原料昆蟲相關產品生產的基礎研究

紫膠、白蠟、五倍子研究是資源昆蟲所的優勢。在提升五倍子質量、產量研究過程中,五倍子同母體間營養物質、信號的交換運輸,可以通過非損傷對母體-蟲癭連接部進行檢測。類似的研究,在愈傷組織上已經開展。

 

此外,蠶絲形成的主要器官絲腺,也有研究者已經利用非損傷開展離子轉運相關研究。

2、森林病蟲害研究

1)蟲害

“離子流信號是植物感受外界刺激的原初信號”。北京林業大學沈應柏教授在接受中關村非損傷微測技術產業聯盟(簡稱“NMT聯盟”)采訪時表示,在植物抗蟲防御研究中,植物為什么能夠識別出昆蟲取食?這與離子流信號的傳遞密切相關。

在應對外界刺激時,植物也會做出多種調整,其中很重要的一點就是調節氣孔的開閉。沈應柏教授利用非損傷,對氣孔調節機制進行了深入研究,并在Plant Journal(2015, 83(4): 638-649.)上發表了研究成果。

2)病害

Ca2+振蕩是病原菌與植物形成穩定互作的標志。

病原菌侵染后葉肉組織的Ca2+流振蕩現象

J Membrane Biol, 1998, 161(1): 45-54.

90年代末,研究者們就開始利用NMT研究植物病原體侵染過程的微觀信號傳遞。目前的研究成果顯示,病原體侵染植物的過程,與Ca2+、K+、Cl-等諸多離子流信號相關。

  • Plos Pathog:農科院寧約瑟中農王毅|NMT驗證稻瘟病菌利用K通道抑制先天免疫

  • 植物病原防御第一步:Ca2+相關質膜陰離子通道打開

  • Ca2+外流作為細胞防御過程中的標志性反應

3、森林培育之良種生產

耐鹽堿、耐瘠薄、生長周期短、產量高。非損傷在林木育種領域的應用,相比于其它領域尤為突出。北京林業大學陳少良教授是國內最先應用NMT進行林木抗逆研究的研究者,其2009年發表的通篇使用NMT離子流數據的文章(Plant Physiol, 2009, 149: 1141-1153.),引用次數已達177次。目前,Na+、K+、H+流,已成為陳少良教授實驗室研究的基石。

其后,來自林科院蘇曉華研究員、西北農林科技大學(現中國林科院)的羅志斌教授、東北林業大學(現浙江農林大學)柳參奎教授、林科院亞林所卓仁英研究院,在林木鹽堿脅迫、氮營養、重金屬脅迫等領域,發表了諸多研究成果。

  • Front Plant Sci:林科院亞林所卓仁英NMT驗證Cu/Zn SOD促進植物富集鎘

  • J Exp Bot:西北農林羅志斌組楊樹適應氮受限環境的代謝機制

  • Plant Biotechnol J:PutVHA-c促根系排Na提升植物耐鹽能力

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