植物脯氨酸檢測試劑盒

● 產品簡介：

脯氨酸(Proline，Pro)是一種環狀的α-亞氨基酸，呈中性，等電點為6.30，易溶于水。在正常環境情況下脯氨酸含量較低，但在逆境下(旱、熱、冷、凍、鹽堿等)，脯氨酸常有明顯積累，即積累指數與植物的抗逆性有關。植物脯氨酸檢測試劑盒(茚三酮比色法)檢測原理是脯氨酸與茚三酮共熱發生反應，能產生穩定的紅色產物，以分光光度計測定處吸光度，在一定范圍內顏色深淺(即吸光度)與脯氨酸濃度成正比。

該試劑盒不使用傳統的磺基水楊酸和甲苯等有害溶劑，經濟環保。

該試劑盒主要用于測定植物組織中的游離脯氨酸含量，不適用于動物及醫療樣品中脯氨酸的測定。

按照一次使用1 ml Pro顯色液計算，試劑盒可以使用50次。

● 自備材料：

植物根莖、葉子等；剪刀；螺蓋離心管或鎖蓋離心管或96孔板；1ml玻璃比色皿；分光光度計或酶標儀；水浴鍋或干浴器；離心機

● 操作步驟：

1、 樣本處理：

取新鮮植物組織，清洗干凈，擦干，剪碎，迅速稱取， 按照20mg重量加入1ml Pro裂解液的比例加入Pro裂解液（建議使用1.5ml螺口離心管或鎖蓋離心管），沸水浴或干浴處理20分鐘 (期間間歇混勻)，10000rpm離心 2分鐘，上清即為脯氨酸提取液，4℃保存備用。待測提取液如不能及時測定，應置于-20℃保存，1-2天內穩定。

2、 Pro顯色液的配制：

把小管裝的茚三酮粉末，全部加入到茚三酮溶解液中，劇烈混勻至完全溶解，即配成Pro顯色液。注意：Pro顯色液具有一定腐蝕性，請小心操作。

3、 配制系列脯氨酸標準溶液：

取1ml 試劑1-Pro裂解液全部加入到裝有Pro標準液的小管中，混勻后徹底溶解，即配成的Pro標準液（100mg/ml）。

取1 μl 100mg/ml 標準液加入到1ml Pro裂解液中，即配成100μg/ml Pro標準液待用。參照下表配制1-6號不同濃度的Pro標準溶液。

4、 樣品測定:

= 1 \* GB3 ① 分光光度計測定：參考下表設置反應混合液，依次加入試劑：

= 2 \* GB3 ② 酶標儀測定：參考下表設置反應混合液，依次加入試劑：

④ 冰浴或流水冷卻至室溫，10000 rpm離心 2分鐘，如發現沒有不溶物，也可以不離心。 

⑤ 取上清，用空白管作為對照，用分光光度計或酶標儀檢測分別測定反應混合液520nm吸光度值。 

5、 計算：

以系列脯氨酸標準(1-6號管)含量(μg)為橫坐標，以對應的吸光度為縱坐標，制作標準曲線，根據測定管的吸光度進而計算其脯氨酸含量。

植物組織樣品脯氨酸含量(μg/g)=（C×V_T）/(W×V_S)

C=從標準曲線上查得的脯氨酸含量(μg)

V_T=步驟1中脯氨酸提取液總體積(ml)

W=步驟1中使用的樣品鮮重(g)

V_S=步驟4中測定時加入的脯氨酸提取液體積(ml)