MOI （multiplicity of infection），即感染復(fù)數(shù)，指的是感染時(shí)病毒與細(xì)胞數(shù)量的比值。一般認(rèn)為MOI是一個(gè)比值，沒有單位，其實(shí)其隱含的單位是pfu number/cell。但對(duì)于某些病毒如AAV病毒，無(wú)法用pfu表示病毒的數(shù)量，而是采用TU、IU、病毒顆粒（viral particles, v.p）或基因組數(shù)量（vector genome,v.g.）來(lái)表示病毒數(shù)量。

慢病毒（Lentivirus）載體是基于HIV-1（人類免疫缺陷I型病毒）的單鏈RNA病毒載體，可感染分裂或非分裂細(xì)胞，并將外源基因有效地整合到宿主染色體上，且具有較低的免疫原性，被廣泛應(yīng)用于各種體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中。

• 常見細(xì)胞MOI參考值（慢病毒）

• 慢病毒MOI值摸索步驟

• 實(shí)驗(yàn)前信息準(zhǔn)備

• MOI梯度設(shè)置

在查閱到的參考MOI值前后各設(shè)置2個(gè)梯度，每個(gè)梯度至少相差2倍，舉例：查閱到某細(xì)胞系在文獻(xiàn)中慢病毒MOI應(yīng)用為10，則設(shè)置MOI梯度為2.5-5-10-20-40。

根據(jù)公式計(jì)算所需添加的病毒量：

MOI值=病毒滴度（TU/mL）×病毒體積（mL）/細(xì)胞個(gè)數(shù)

• 鋪細(xì)胞

在96孔板中鋪1×10⁴個(gè)細(xì)胞/孔，培養(yǎng)基定容至100μL/孔；

• 慢病毒感染

       依據(jù)所計(jì)算出的病毒體積，逐個(gè)孔添加慢病毒，并于感染次日更換新鮮培養(yǎng)基。

（5）確定MOI范圍

a．帶熒光標(biāo)簽的慢病毒：觀察熒光

感染后72小時(shí)后，于熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)和熒光情況，確定細(xì)胞狀態(tài)較好且熒光數(shù)較多的孔，對(duì)應(yīng)為較適宜的MOI值。

• 不帶熒光標(biāo)簽的慢病毒：抗性篩選（puromycin/blasticidin等）

查閱相應(yīng)抗性素在相應(yīng)細(xì)胞株中的篩選濃度，于感染后72小時(shí)加入藥物，培養(yǎng)3-5天，鏡下觀察，選取細(xì)胞存活率較高且細(xì)胞狀態(tài)較好的孔，對(duì)應(yīng)為較適宜的MOI值。

（6）縮小MOI范圍進(jìn)行二次摸索（附加步驟）

如需較為精確的MOI值，可在步驟（5）中確定的MOI范圍內(nèi)再設(shè)置MOI梯度，實(shí)驗(yàn)方法同步驟（3）—（5）。舉例：

• 慢病毒感染中的常見問(wèn)題

（1）怎樣提高慢病毒的感染效率？

細(xì)胞良好的生長(zhǎng)狀態(tài)是達(dá)到高感染效率的保證。必要時(shí)可在感染時(shí)加入助感染試劑ADV-HR來(lái)提高慢病毒的感染效率。

（2）助感染試劑ADV-HR的使用濃度和使用方法是什么？

助感染試劑ADV-HR能夠顯著提高慢病毒的感染效率，并呈現(xiàn)劑量和時(shí)間依賴效應(yīng)。但較高濃度的ADV-HR具有細(xì)胞毒性，影響細(xì)胞狀態(tài)和感染效率。我們建議您務(wù)必于目的細(xì)胞中進(jìn)行ADV-HR濃度梯度預(yù)實(shí)驗(yàn)。我們?cè)贖EK293中的實(shí)驗(yàn)表明，當(dāng)ADV-HR使用濃度小于等于1.0×10^-2mg/mL時(shí)，細(xì)胞狀態(tài)良好。

（3）慢病毒感染后為什么細(xì)胞中出現(xiàn)大量黑點(diǎn)，并影響細(xì)胞生長(zhǎng)？

    在排除細(xì)菌及真菌污染后，細(xì)胞中的黑點(diǎn)通常為細(xì)胞碎片，導(dǎo)致細(xì)胞破碎的原因有很多，但在慢病毒感染后，細(xì)胞破碎通常有兩個(gè)原因：a. 慢病毒使用量過(guò)多，或細(xì)胞數(shù)量過(guò)少；b. 支原體污染。

    由于輕度的支原體污染并不影響細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖，故支原體污染被許多實(shí)驗(yàn)室所忽略。但支原體易在病毒感染細(xì)胞后爆發(fā)，故會(huì)出現(xiàn)大量細(xì)胞碎片。我們建議在使用病毒制品時(shí)，應(yīng)首先排除細(xì)胞、培養(yǎng)物及培養(yǎng)環(huán)境中的支原體污染，以節(jié)約您的寶貴時(shí)間。

（4）慢病毒應(yīng)如何保存？

    建議您于收貨后第一時(shí)間分裝，并將病毒儲(chǔ)存于液氮或-80℃。切勿反復(fù)凍融！在未經(jīng)凍融情況下，持續(xù)-80℃儲(chǔ)存環(huán)境可質(zhì)保6個(gè)月，超出該儲(chǔ)存條件則需重新進(jìn)行質(zhì)控鑒定。