Countstar Rigel S3 熒光細胞分析儀特點及免疫治療領域的應用
背景
CAR-T生產全程的質量把控
 |
應用范圍： ·PBMCs, 全血, Car-T ·干細胞
·脾細胞
·單核細胞
·其它原代細胞
·T/NK 細胞介導的細胞毒性 |
Countstar® Rigel是集三熒光通道的電子顯微鏡功能、圖像分析、細胞計數于一體的臺式儀器。這臺全自動圖像采集分析設備為細胞計數，細胞活率以及T/NK細胞介導的細胞毒性檢測提供一體化解決方案。儀器內預置了多個實驗類型，包括臺盼藍計數、AO/PI雙熒光計數、細胞殺傷、細胞凋亡及細胞周期等。這些預置的實驗類型可以極大程度簡化例行的細胞實驗室的工作。Countstar® Rigel系統提供一個標準的，滿足GMP需要的細胞質量控制解決方案。
·AO/PI 雙熒光計數:通過雙熒光法染色，快速準確測定細胞濃度，活率，同時可以排除雜質，細胞碎片以及無核細胞的干擾。
三步法:
Countstar® Rigel系統通過簡單的三步操作，僅需20微升樣品，即可從樣品到結果，每個計數樣本都會自動顯示細胞總數、濃度和平均直徑等信息。+結果顯示界面。
快速和穩定的檢測結果
Countstar® Rigel系統可以一次自動檢測5個樣品，這樣可以大大提高檢測效率和降低成本。同時結合專利的“固定焦距”，結果會更加穩定和可靠。
符合GMP要求以及FDA 21 CFR Part 11
Countstar® Rigel系統是為了滿足現代制藥需求而設計。軟件符合21 CFR Part 11，包括電子簽名，電子記錄，審計追蹤功能等。于此同時，我們提供IQ/OQ服務以及PQ支持，幫助用戶建立一個可靠的檢測系統。
用戶友好和靈活的軟件系統
APP式管理，每一個實驗類型可以被復制，不同的項目和不同的操作者可以有獨立的實驗類型，數據會按照APP進行分類，這樣可以使數據管理的工作大大簡化。Countstar® Rigel的軟件可以自動生成PDF報告。報告包含有關記錄數據的最關鍵信息的摘要。
4.Countstar® Rigel在免疫治療領域的應用
免疫療法，如CAR-T治療包括從病人收集外周血單核細胞（PBMC），然后分離所需的T細胞亞群，通過基因改造產生工程CAR-T細胞，CAR-T細胞在體外大規模擴增后再回輸到患者。 Countstar® Rigel系統可以對整個CAR-T生產過程中細胞濃度，活率進行監測，并且符合GMP的要求。
AO/PI雙熒光法檢測活率：
吖啶橙和碘化丙啶是可以和細胞核核酸結合的熒光染料。AO可以穿透活細胞和死細胞對細胞核進行染色并發出綠色熒光，PI進入死細胞對細胞和進行染色并發出紅色熒光。因此AO/PI為細胞核染料，可以準確區分活細胞與死細胞，而且可以排除雜質或者非特異細胞的干擾，進行精準的濃度活率檢測。
T/NK 細胞介導的細胞毒性
CAR-T療法，用基因工程的方法對T細胞進行基因改造以產生可以直接和靶標腫瘤細胞結合并攻擊的CAR-T細胞。
對靶標細胞用無毒的無放射性的鈣黃綠素進行標記（或者GFP轉染標記），我們可以觀察CAR-T細胞對腫瘤細胞殺傷效應。活的腫瘤細胞會含有鈣黃綠素或者GFP，死的腫瘤細胞不含有鈣黃綠素或者GFP。Hoechst33342被用來染色所有的細胞（包含T細胞和腫瘤細胞），PI用來染色所有的死細胞（包含T細胞和腫瘤細胞）。這種染色策略可以讓我們對細胞進行精準的區分。
細胞毒性％=（對照組的活細胞數 – 實驗組的活細胞數）/（對照組的活細胞數x 100）
E：T比率對K562的細胞毒性研究
隨著E：T比率增加，所得熒光圖像顯示Hoechst + CFSE + PI +靶細胞的增加
細胞凋亡：
細胞凋亡的測定是通過測量細胞早期凋亡激活的標記來了解細胞如何死亡。這些是凋亡細胞的特定生物化學和形態學標記，而在正常細胞和壞死細胞中不發生的此變化。使用Countstar FL通過Hoechst 33342，AnnexinV-FITC，PI標記細胞, 可以將細胞分成不同的階段。該Counstar軟件可以通過直接計數提供即時結果。
GFP轉染
GFP可通過轉基因技術引入動物細胞或其他微生物。 Countstar Rigel S3為檢測GFP轉染提供了一種快速簡便的檢測方法。用Hoechst 33342和碘化丙啶（PI）染色來確定總細胞群和死細胞群以及檢測表達GFP的群體。該軟件可以通過直接計數給出即時結果（包括GFP陽性百分比，濃度和活率）
臺盼藍細胞濃度和活率分析
Countstar® Rigel也可以通過臺盼藍染色法對細胞進行活率和濃度的測定。這里顯示的是細胞系的放大代表圖像。由于所有細胞都用臺盼藍染色，顯示細胞臺盼藍染色圖像以及Countstar S1細胞識別圖像。
