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最主流的細胞活力檢測方法—CTG(CELL TITER-GLO)發光法簡介

瀏覽次數:11046 發布日期:2018-4-27  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負

細胞增殖檢測技術已廣泛應用于分子生物學、遺傳學、腫瘤生物學、免疫學、藥理和藥代動力學等研究領域。細胞增殖是指細胞在周期調控因子的作用下,通過DNA復制、RNA轉錄和蛋白質合成等復雜反應而進行的分裂系列過程。細胞通過分裂的方式增殖,細胞增殖是生物體的重要生命特征 。單細胞生物以細胞分裂的方式產生新個體,多細胞生物以細胞分裂的方式產生新的細胞,從而補充體內衰老和死亡的細胞。細胞增殖的同時,在細胞群體中總有一些因各種原因而死亡的細胞,活細胞在總細胞中所占的百分比叫做細胞活力

檢測細胞存活與增殖的方法主要包括觀察DNA合成含量和檢測細胞代謝活性兩種,前者主要是DNA前體物質(胸腺嘧啶核苷類似物)摻入法,比如BRDU、EDU法;后者主要為MTT、XTT、MTS、CCK-8、WST-1及WST-8法等,在后者中現在最主流的就是CTG(CELL TITER-GLO)發光法,此法可快速靈敏的檢測活細胞數量,市場上常用的是Promega公司CellTiter-Glo化學發光細胞活性檢測試劑盒。

ATP腺嘌呤核苷三磷酸(簡稱三磷酸腺苷)參與生物體內多種酶促反應,是活細胞新陳代謝的一個指標,其含量直接反應了細胞的數量及細胞狀態:實驗過程中向細胞培養基加入等體積CellTiter-Glo™試劑,測量發光值,在光信號和體系中,發光值與ATP量成正比,而ATP又和活細胞數正相關,因此可通過檢測ATP含量得細胞活力。同普通的MTT、CCK8法相比,CellTiter-Glo™發光活細胞檢測系統的檢測試劑具有最高靈敏度和較長的信號持續時間,此系統已經廣泛地應用在生命科學研究領域中,如一些生物活性因子的活性檢測、大規模的抗腫瘤藥物篩選、細胞毒性試驗以及腫瘤放射敏感性測定等,各實驗室已普遍使用此技術。此法還有很多優點,如細胞活性分析是高效的“加樣-混合-測量”系統,實驗操作方便快捷,同時節約細胞用量。CellTiter-Glo™試劑和細胞培養中的常用培養基兼容,如RPMI1640、MEM、DMEMand Ham's F12,也不受酚紅和有機溶劑的影響,誤差小,準確率高。同MTT、CCK8法具體對比可見下表:

發布者:武漢盛世華康生物醫藥科技有限公司
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