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細胞復蘇注意事項

瀏覽次數:3460 發布日期:2017-9-8  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負

細胞復蘇注意事項:

1、仔細閱讀細胞說明書,了解細胞相關信息,如細胞形態、所用培養基、血清比例,配置相應的完全培養基,確保細胞培養條件與說明書一致。若由于培養條件不一致而導致細胞出現問題,責任由客戶自行承擔。每株細胞2支凍存管復蘇時建議先只復蘇一支,若首次復蘇出現問題請及時與我們取得聯系。

2、取出凍存管,浸入37℃溫水浴中,并不時搖動令其盡快融化,注意管口不要沒入水面以下,以免造成污染。

3、從37℃水浴中取出凍存管,用75%酒精擦拭凍存管表面,放入超凈臺內。吸出細胞懸液,轉移至培養瓶內,補加6~8mL培養液,37℃溫箱靜置培養,隔天換新鮮培養液,以去除DMSO,或者復蘇當時離心去除DMSO,并在顯微鏡下觀察細胞狀態和密度;對于貼壁展開較慢的細胞,建議復蘇當時去除DMSO,待細胞貼壁展開后再換液。(原代細胞:細胞懸液離心后觀察管底沉淀初步判斷細胞量,后行臺盼藍染色以確定細胞存活率;接種后隔天觀察細胞貼壁量,以判定細胞貼壁率)

4、貼壁細胞:過夜培養后多數細胞會重新貼壁,待匯合度80% 左右時正常傳代。若細胞仍不能貼壁,請用臺盼藍染色法鑒定細胞活力。如臺盼藍染色證實細胞活力正常則1000rpm離心3~5min收集細胞,用新鮮培養基重懸后移回培養瓶內重新貼壁培養;如臺盼藍染色證實細胞無活力,請在收到細胞24小時內聯系我們,并反饋真實的細胞狀態照片和臺盼藍染色照片,我們將盡快幫您解決。

5、懸浮細胞:過夜培養后多數細胞會逐漸恢復活力,有光澤、飽滿。若細胞光澤暗淡,用臺盼藍染色法鑒定細胞活力,如臺盼藍染色證實細胞無活力,請在收到細胞24小時內聯系我們,并反饋真實的細胞狀態照片和臺盼藍染色照片,我們將盡快幫您解決。

6、建議客戶在收到細胞后每天各拍幾張細胞照片,記錄細胞狀態,便于和中國微生物菌種查詢網技術部溝通交流。


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