人甲羥戊酸激酶 (MVK) 酶聯免疫分析（ELISA）試劑盒使用說明書

本試劑僅供研究使用

目的：本試劑盒用于測定人血清，組織及相關液體樣本中人甲羥戊酸激酶

(MVK) 含量。

實驗原理：

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人甲羥戊酸激酶 (MVK) 水平。用純化的人甲羥

戊酸激酶 (MVK) 抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入甲羥戊酸

激酶 (MVK) ，再與 HRP 標記的甲羥戊酸激酶 (MVK) 抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗

體復合物，經過徹底洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉化成藍色，并在

酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的甲羥戊酸激酶 (MVK) 呈正相關。用

酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD 值），通過標準曲線計算樣品中人甲羥戊酸激酶

(MVK) 濃度。

試劑盒組成：

試劑盒組成 48 孔配置 96 孔配置 保存

說明書 1 份 1 份

封板膜 2 片（48） 2 片（96）

密封袋 1 個 1 個

酶標包被板 1×48 1×96 2-8℃保存

標準品：450pg/mL 0.5ml×1 瓶 0.5ml×1 瓶 2-8℃保存

標準品稀釋液 1.5ml×1 瓶 1.5ml×1 瓶 2-8℃保存

酶標試劑 3 ml×1 瓶 6 ml×1 瓶 2-8℃保存

樣品稀釋液 3 ml×1 瓶 6 ml×1 瓶 2-8℃保存

顯色劑 A 液 3 ml×1 瓶 6 ml×1 瓶 2-8℃保存

顯色劑 B 液 3 ml×1 瓶 6 ml×1 瓶 2-8℃保存

終止液 3ml×1 瓶 6ml×1 瓶 2-8℃保存

濃縮洗滌液 （20ml×20 倍）×1 瓶 （20ml×30 倍）×1 瓶 2-8℃保存

樣本處理及要求：

1.血清：室溫血液自然凝固 10-20 分鐘，離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉/分）。仔細收集上

清，保存過程中如出現沉淀，應再次離心。

2.血漿：應根據標本的要求選擇 EDTA、者檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合 10-20 分鐘后，

離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應該再

次離心。

3.尿液：用無菌管收集，離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉/分）。仔細收集上清，保存過程中

如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。

4.細胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉/

分）。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時，用 PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃

度達到 100 萬/ml 左右。通過反復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心 20 分鐘

左右（2000-3000 轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。

5.組織標本：切割標本后，稱取重量。加入一定量的 PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)?/P>

用。標本融化后仍然保持 2-8℃的溫度。加入一定量的 PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將

標本勻漿充分。離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，

其余冷凍備用。

操作步驟

1. 標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設標準品孔 10 孔，在第一、第二孔中分別加標

準品 100μl，然后在第一、第二孔中加標準品稀釋液 50μl，混勻；然后從第一孔、第二

孔中各取 100μl 分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液 50μl，

混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取 50μl 棄掉，再各取 50μl 分別加到第五、第六孔

中，再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液 50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各

取 50μl 分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液 50μl，混

勻后從第七、第八孔中分別取 50μl 加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標準

品稀釋液 50μl，混勻后從第九第十孔中各取 50μl 棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為 50μl，

濃度分別為 300 pg/mL，200 pg/mL ，100 pg/mL，50 pg/mL，25 pg/mL）。

2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、待測樣

品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl，然后再加待測樣品 10μl（樣

品最終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混

勻。

3. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。

4. 配液：將 30（48T 的 20 倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30（48T 的 20 倍）倍稀釋后備用。

5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此

重復 5 次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶標試劑 50μl，空白孔除外。

7. 溫育：操作同 3。

8. 洗滌：操作同 5。

9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色

15 分鐘.

10. 終止：每孔加終止液 50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。

11. 測定：以空白空調零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應在加終止

液后 15 分鐘以內進行。

注意事項：

1． 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未

用完，板條應裝入密封袋中保存。

2． 濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。

3． 各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間最好