一、有關(guān)產(chǎn)品固相載體

可作酶聯(lián)免疫吸附劑測定中載體的物質(zhì)很多，例如：聚苯乙烯、聚氯乙烯、以含鐵的磁性微粒制作的、還有微孔濾膜，如硝酸纖維素膜、尼龍膜等。

最常用的是聚苯乙烯。聚苯乙烯具有較強(qiáng)的吸附蛋白質(zhì)的性能，抗體或蛋白質(zhì)抗原吸附其上后保留原來的免疫活性。聚苯乙烯為塑料，可制成各種形式。在酶聯(lián)免疫吸附劑測定測定過程中，它作為載體和容器，不參與化學(xué)反應(yīng)，所以被普遍采用。

酶聯(lián)免疫吸附劑測定載體的形狀主要有三種：小試管、小珠和微量反應(yīng)板。最常用的載體為微量反應(yīng)板。良好的酶聯(lián)免疫吸附劑測定板應(yīng)該是吸附性能好，空白值低，孔底透明度高，各板之間和同一板各孔之間性能相近。

二、抗原和抗體

在酶聯(lián)免疫吸附劑測定實(shí)施過程中，抗原和抗體的質(zhì)量是實(shí)驗是否成功的關(guān)鍵因素。

聯(lián)免疫吸附劑測定所用抗原有三個來源：天然抗原、重組抗原和合成多肽抗原。天然抗原取材于動物組織或體液、微生物培養(yǎng)物等，一般含有多種抗原成分，需經(jīng)純化，提取出特定的抗原成分后才可應(yīng)用，因此也稱提純抗原。重組抗原和多肽抗原均為人工合成品，使用安全，而且純度高，干擾物質(zhì)少。

用于酶聯(lián)免疫吸附劑測定的抗體有多克隆的和單克隆的。

三、免疫吸附劑

固相的抗原或抗體稱為免疫吸附劑。將抗原或抗體固相化的過程稱為包被。由于載體的不同，包被的方法也不同。包被好的酶聯(lián)免疫吸附劑測定板在低溫可放置一段時間而不失去其免疫活性。

四、酶和底物

酶聯(lián)免疫吸附劑測定中所用的酶要求純度高、催化反應(yīng)的轉(zhuǎn)化率高、專一性強(qiáng)、性質(zhì)穩(wěn)定、來源豐富、價格不貴、制備成的酶標(biāo)抗體或抗原性質(zhì)穩(wěn)定，繼續(xù)保留著它的活性部分和催化能力。酶聯(lián)免疫吸附劑測定中最常用的酶為辣根過氧化酶（HRP）

五、結(jié)合物

酶標(biāo)記的抗原或抗體稱為結(jié)合物。抗原由于化學(xué)結(jié)構(gòu)不同，可用不同的方法與酶結(jié)合。如為蛋白質(zhì)抗原，基本上可參考抗體酶標(biāo)記的方法。

1． 戊二醛交聯(lián)法戊二醛是一種雙功能團(tuán)試劑，可以使酶與蛋白質(zhì)或其他抗原的氨基通過它而偶聯(lián)。戊二醛交聯(lián)可用一步法（如連接AP），也可用二步法（如連接HRP）。

2． 過碘酸鹽氧化法本法只用于HRP的交聯(lián)。該酶含18％碳水化合物，過碘酸鹽將其分子表面的多糖氧化為醛基。用硼氫化鈉（NaBH4）中和多余的過碘酸。酶上的醛根很活潑，可與蛋白質(zhì)結(jié)合，形成按摩爾比例結(jié)合的酶標(biāo)結(jié)合物。有人認(rèn)為此法為辣根過氧化物酶交聯(lián)最有效的方法。但也有只認(rèn)為由于所用試劑較為劇烈，各批實(shí)驗結(jié)果不易重復(fù)。

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