腦功肽口服液抗焦慮作用實驗研究

摘要： 目的 通過動物行為學試驗模型研究腦功肽口服液的抗焦慮作用。 方法 采用小鼠高架十字迷宮試驗 (EＰＭ) 和大鼠敞箱試驗(OFＴ)， EＰＭ 試驗選取開臂時間百分比 （OＴ% ） 、 開臂次數(shù)百分比 （OE% ） 、 總?cè)氡鄞螖?shù)、 總?cè)氡蹠r間為觀察指標； OFＴ 試驗選取總路程、中央?yún)^(qū)域路程、 中央?yún)^(qū)域時間為觀察指標。 分別設空白對照組、 地西泮組、 腦功肽高劑量組與腦功肽中劑量組進行觀察。 結(jié)果 在EＰＭ 試驗中， OＴ% 與 OE% 地西泮組分別為 （5１. ２３ ± １7. 47） % 和 （5３. ２8 ± １4. 96） % ，腦功肽高劑量組分別為 （３8. 67 ± １5. ２３） % 和（57. 4３ ± 8. １6） % ，均與空白對照組有顯著性差異 （ Ｐ ﹤ ０. ０5） ； OFＴ 試驗中，地西泮能顯著增加中央?yún)^(qū)域時間 （ Ｐ ﹤ ０. ０5）。結(jié)論 EＰＭ試驗顯示，腦功肽口服液具有抗焦慮作用。

關鍵詞： 腦功肽口服液；焦慮；高架十字迷宮試驗；大鼠敞箱試驗

腦功肽口服液為我院院內(nèi)制劑，由遠志、 酸棗仁、 天麻、 石菖蒲等 １4 味中藥組方，具有調(diào)節(jié)腦功能、 平衡大腦興奮與抑制過程、 增強記憶力、 促進腦細胞代謝、 改善腦循環(huán)和醒腦提神等作用 ，能緩解睡眠障礙患者的焦慮癥狀。 我科對該制劑分別進行了質(zhì)量標準研究和急性毒性研究，但對其抗焦慮作用的機制未進行研究。 本研究中通過小鼠高架十字迷宮試驗 （EＰＭ） 與大鼠敞箱試驗 （OFＴ），研究腦功肽口服液對動物行為學的影響，以考察其抗焦慮作用。

1 材料與方法

１． １ 儀器、 動物與試藥
XR-XG201型高架十字迷宮試驗視頻分析系統(tǒng)，XR-XZ301型自發(fā)活動視頻分析系統(tǒng) （上海欣軟信息科技有限公司） ；ＭE２３5S 型電子分析天平 （德國賽多利斯公司） 。 清潔級健康雄性昆明種小鼠 6０ 只，初始體重 １8 ~ ２２ g；清潔級健康雄性 SD 大鼠[許可證號： SＣXK （渝） ２０１２ - ０００5]6０ 只，初始體重 １6０ ~ １8０ g，由第三軍醫(yī)大學大坪醫(yī)院動物實驗中心提供。 所有動物提前 １ 周購入，清潔級動物 [許可證號： SＹXK （渝） ２０１２ - ００１１]常規(guī)飼養(yǎng)。地西泮片 （湖北制藥有限公司，批號為 ２０１１０6０4） ，試驗時用雙蒸水配制成 ０. ２ g / L 的溶液；腦功肽原液 （NGＴ） 由第三軍醫(yī)大學新橋醫(yī)院藥劑科中藥制劑室提供 （批號為 ２０１３０１１4） ，高、 中劑量組用雙蒸水分別配制每 １ mL 含 １. 8， ０. 9 g 生藥的藥液，雙蒸水為新橋醫(yī)院藥劑科普通制劑室制備。

１． ２ 試驗方法
分組與給藥：行為學試驗前，將動物飼養(yǎng)于正常晝夜循環(huán)的環(huán)境中。 室溫控制在 （２０ ± ２） ℃ ，自由攝食飲水，適應性喂養(yǎng) ３ d后，每天安撫動物 ２ min，持續(xù) ３ d，減少無關刺激對試驗的影響。給藥前將動物隨機分為空白對照組 ( Ａ 組 ) 、 地西泮陽性對照組 (B 組 )、 腦功肽高劑量組 (Ｃ１ 組 )、 腦功肽中劑量組 (Ｃ２ 組 )，各１5 只，各組每天 8： ００ ~ ２１： ００ 灌服給藥，灌胃量小鼠每 ２０ g 體重０. ２ mL，大鼠每 ２００ g 體重 ２ mL，連續(xù) 7 d，末次給藥 ３０ min 后進行行為學試驗，試驗時間段為 8： ００ ~ １4： ００。EＰＭ 與 OFＴ 試驗：實驗室光線保持恒亮，以 １. 5 m 距離處能辨認小鼠細微活動的最低亮度為準，室溫約 １5 ℃ ，保持實驗室安靜。 測試前將每只小鼠放于 6０ cm × 6０ cm × ３5 cm 敞箱中，自由探究 5 min，然后迅速置試驗系統(tǒng)的中央平臺上，頭朝向一開放臂，放開后開始計時，由儀器記錄 5 min 內(nèi)的活動指標。 觀察指標包括，進入開放臂次數(shù) （OE） ；進入到任一開放臂的次數(shù)，以小鼠4 個爪子均進入到臂內(nèi)為準，中途 １ 個爪子從該臂中完全退出則為該次進入活動完成；進入開放臂時間 （OＴ） ；進入封閉臂次數(shù)（ＣE） ，進入到任一封閉臂的次數(shù)，以小鼠 4 個爪子均進入到臂內(nèi)為準 ；進 入封 閉 臂時 間（ＣＴ） ；開 臂時 間 百 分率 (OＴ% ) = OＴ /（OＴ + ＣＴ）× １００% ；開臂次數(shù)百分率 (OE% ) = OE （ / OE + ＣE）×１００% ；總?cè)氡鄞螖?shù)， OE + ＣE；總?cè)氡蹠r間， OＴ + ＣＴ。 實驗室保持安靜，大鼠迅速置于敞箱中央 （尺寸為 １００ cm × １００ cm × 45 cm） ，釋放后記錄 １０ min 內(nèi)大鼠活動指標。 每次完成記錄后，用 5% 醋酸水溶液擦拭箱底，清除糞便，繼續(xù)用干布擦凈，排除氣味對下一只大鼠的干擾。 觀察指標包括總路程 （mm） 、 中央?yún)^(qū)域路程 （mm） 、中央?yún)^(qū)域時間 （s） 。

１． ３ 統(tǒng)計學處理
采用 SＰSS １7. ０ 統(tǒng)計軟件分析，試驗數(shù)據(jù)均以 Ｘ ± s 表示，組間比較采用單因素方差分析。Ｐ ﹤ ０. ０5 為差異有統(tǒng)計學意義。

3 討論

本試驗中采用了 ２ 種行為學效應模型考察腦功肽口服液的抗焦慮作用，其中 EＰＭ 試驗是抗焦慮研究中公認結(jié)果可靠的模型，動物具有探究性，放入迷宮后會主動探究開臂，但又懼怕開臂中高懸敞開的環(huán)境，抗焦慮藥能增加動物在開臂的探究活動，而致焦慮劑則相反。 動物 OE% 與 OＴ% 是該模型的重要指標，抗焦慮劑通常會增加動物 OE% 值與 OＴ% 值，而不影響總?cè)氡鄞螖?shù)與時間。 本試驗結(jié)果顯示，地西泮組與腦功肽高劑量組對小鼠OE% 值與 OＴ% 值均有顯著升高作用，而總?cè)氡鄞螖?shù)與時間無顯著性差異，說明兩者均有抗焦慮作用。

在 OFＴ 試驗中，大鼠進入敞箱后因其對新異環(huán)境的恐懼而主要在敞箱內(nèi)靠周邊的區(qū)域活動，而抗焦慮藥能明顯增加大鼠進入敞箱中央?yún)^(qū)的次數(shù)及在中央?yún)^(qū)停留的時間。 本試驗結(jié)果顯示，地西泮能顯著增加大鼠中央?yún)^(qū)域活動時間，顯示地西泮具有一定的抗焦慮作用，而高劑量與中劑量腦功肽對大鼠的中央?yún)^(qū)域活動時間與路程均無影響，說明在此模型下高劑量與中劑量腦動肽未能顯示出抗焦慮作用。 但大鼠 OFＴ 試驗應用于焦慮模型時間不長，其穩(wěn)定性及可靠性有待進一步驗證。

EＰＭ 試驗與臨床觀察結(jié)果均顯示，腦功肽口服液有一定的抗焦慮作用，在進一步的研究中，將考察腦功肽口服液對動物腦組織中單胺類和氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)的影響，以揭示其抗焦慮作用的具體機制。