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熒光原位雜交(FISH)技術的應用與實驗流程

瀏覽次數:6356 發布日期:2016-8-3  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負

分子診斷是診斷市場增長最快的部分。螢光原位雜交和FISH分析包括700萬人口的5億美元的市場。。FISH市場預計為11%,較去年同期成長為下一個五年。400至500萬人口的市場,在美國產生。FISH測試是用來識別生物標記DNA / RNA的形式。它是用于遺傳作圖和基因表達分析公知的方法。這種技術使用熒光染料標記的探針,并映射到一個染色體或幀內核DNA,以產生在原位通過顯微鏡觀察熒光信號的核苷酸序列。它是如細胞離心涂片(細胞懸浮液),然后觸摸用制劑或福爾馬林固定的新鮮制劑進行的,也可以使用石蠟包埋的(FFPE)組織中。它主要用于以下領域研究和臨床診斷:
•產前診斷
•癌癥診斷
•出生缺陷的分子細胞遺傳學和精神發育遲滯
•染色體異常
•臨床遺傳學
•神經科學
•生殖醫學
•毒理學
•微生物生態學
•進化生物學
•比較基因組學
•細胞基因組學
•區分良性和惡性腫瘤

這個市場的多數是試劑包括FDA批準測試,伴隨診斷,研究僅使用探測器,定制試劑探針和支持和供應。有必要進行雜交執行這些勞動密集型的測試設備。理解需要雜交過程設備要求必須清晰地定義。

必要的設備如下:
——酸度計
——天平
——攪拌盤
——微離心機
——冰箱
——冷凍

組織準備要求:
——切片機
——水浴
——烤箱

執行FISH過程將需要下列設備和材料除了試劑:
——幻燈片干燥機
——水浴
——雜交爐
——Coplin罐子
——蓋玻片
——染色皿
——橡膠膠水(可選:取決于設備使用)
——熒光顯微鏡DAPI過濾器(藍色),FITC過濾器(綠色),德州紅色過濾器攝影的能力

FISH的過程——簡化
樣品準備——depariffinization、脫水、空氣干燥,預處理(95 C @ 30分鐘,Coplin Jar),蛋白酶治療(37°C 10 - 20分鐘,Coplin Jar),脫水,空氣干燥,馬克,適用FISH類探測器,
用水泥覆蓋玻璃
變性 - 5分鐘@ 75°C(45 - 50℃,中期擴展+額外的步驟,以變性探針)雜交 - 37℃,16小時 - 72小時

貼標過程
直接標記 - 標簽結合到探針和它是較不敏感的
間接標記 - 檢測之前附加步驟,用抗體,結果放大單檢測探頭
存儲 - 4 - 8°C長達兩個月的時間,在黑暗區域 - 感光

關鍵的流程步驟
在FISH的過程分為兩個步驟需要的設備用于加熱的幻燈片;所述變性步驟和雜交。這些步驟是最FFPE FISH程序相似。
變性:變性的探針和雙鏈DNA
平均時間:5分鐘
標準溫度:75℃
雜交:探針雜交到靶核酸
時間范圍:16 - 72小時
標準溫度:37℃
已經孵育好的幻燈片必須儲存在4 - 8°C,直到他們在顯微鏡下進行拍攝。他們可以在這些溫度儲存數月之久。

上海書俊儀器設備有限公司代理美國Boekel原位雜交產品,了解更多信息,請聯系021-64825207/010-83659476/020-82528560進行咨詢或轉接。

發布者:上海書俊儀器設備有限公司
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