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免疫共沉淀(Co-IP)的原理及步驟介紹

瀏覽次數(shù):4315 發(fā)布日期:2016-3-9  來源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)

一.原理

免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎(chǔ)的用于研究蛋白質(zhì)相互作用的經(jīng)典方法,是確定兩種蛋白質(zhì)在完整細(xì)胞內(nèi)生理性相互作用的有效方法。其原理是:當(dāng)細(xì)胞在非變性條件下被裂解時,完整細(xì)胞內(nèi)存在的許多蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)間的相互作用被保留了下來。如果用蛋白質(zhì)X的抗體免疫沉淀X,那么與X在體內(nèi)結(jié)合的蛋白質(zhì)Y也能沉淀下來。目前常用prorein A預(yù)先結(jié)合固化在argarose的beads上,使之與含有抗原的溶液及抗體反應(yīng)后,beads上的prorein A就能吸附抗原。這種方法常用于測定兩種目標(biāo)蛋白質(zhì)是否在體內(nèi)結(jié)合;也可用于確定一種特定蛋白質(zhì)的新的作用搭檔。

優(yōu)點(diǎn)

(1)相互作用的蛋白質(zhì)都是經(jīng)翻譯后修飾的,處于天然狀態(tài);

(2)蛋白的相互作用是在自然狀態(tài)下進(jìn)行的,可以避免人為的影響;

(3)可以分離得到天然狀態(tài)的相互作用蛋白復(fù)合物。

缺點(diǎn):

(1)可能檢測不到低親和力和瞬間的蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用;

(2)兩種蛋白質(zhì)的結(jié)合可能不是直接結(jié)合,而可能有第三者在中間起橋梁作用;

(3)必須在實(shí)驗(yàn)前預(yù)測目的蛋白是什么,以選擇最后檢測的抗體。所以,若預(yù)測不正確,實(shí)驗(yàn)就得不到結(jié)果,方法本身具有冒險(xiǎn)性。

發(fā)布者:北京啟維益成科技有限公司試劑部
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