富營養化湖中藻量的測定

一、實驗目的

富營養化湖由于水體受到污染，尤以氮磷為甚，致使其中的藻類旺盛生長。此類水體中代表藻類的葉綠素a濃度常大于10微克/升。本實驗通過測定不同水體中藻類葉綠素a濃度，以考查其富營養化情況。

二、器材與用品  

1、分光光度計（波長選擇大于750nm，精度為0.5－2nm）。 

2、比色杯（1cm；4cm）。 

3、臺式離心機（3500r/min）  

4、離心管（15ml具刻度和塞子）；冰箱 

5、勻漿器或小研缽。  

6、蔡氏濾器；濾膜（0.45微克，直徑47mm）。 

7、真空泵（最大壓力不超過300kpa）。  

8、MgCO3懸液：lg MgCO3細粉懸于100ml蒸餾水中。 

9、90％的丙酮溶液：90份丙酮＋10份蒸餾水。 

10、水樣：兩種不同污染程度的湖水水樣各2L. 

三、方法和步驟 

1、按浮游植物采樣方法，湖泊、水庫采樣500ml，池塘300ml。采樣點及采水時間同“浮游植物”。  

2、清洗玻璃儀器：整個實驗中所使用的玻璃儀器應全部用洗滌劑清洗干凈，尤其應避免酸性條件下而引起的葉綠素a分解。 

3、過濾水樣；在蔡氏濾器上裝好濾膜，每種測定水樣取50－500ml減壓過濾。待水樣剩余若干毫升之前加入0.2ml MgCO3懸液、搖勻直至抽干水樣。加入MgCO3可增進藻細胞滯留在濾膜上，同時還可防止提取過程中葉綠素a被分解。如過濾后的載藻濾膜不能馬上進行提取處理，應將其置于干燥器內，放冷（4℃）暗處保存，放置時間最多不能超過48小時。  4、提取；將濾膜放于勻漿器或小研缽內，加2－3ml90％的丙酮溶液，勻漿，以破碎藻細胞。然后用移液管將勻漿液移入刻度離心管中，用5ml90％丙酮沖洗2次，最后向離心管中補加90％丙酮，使管內總體積為10ml。塞緊塞子并在管子外部罩上遮光物，充分振蕩，放冰箱避光提取18－24小時。 

5、離心：提取完畢后，置離心管于臺式離心機上3500r/min，離心10min，取出離心管，用移液管將上清液移入刻度離心管中，塞上塞子，3500r/min在離心10min。正確記錄提取液的體積。

6、測定光密度：藻類葉綠素a具有其獨特的吸收光譜（663nm），因此可以用分光光度法測其含量。用移液管將提取液移入1cm比色杯中，以90％的丙酮溶液作為空白，分別在750、663、645、630nm波長下測提取液的光密度值（OD）。注意：樣品提取的OD663值要求在0.2與1.0之間，如不在此范圍內，應調換比色杯，或改變過濾水樣量。OD663小于0.2時，應該用較寬的比色杯或增加水樣量；OD663大于1.0時，可稀釋提取液或減少水樣濾過量，使用1cm比色杯比色。  

7、葉綠素a濃度計算：將樣品提取液在663、645、630nm波長下的光密度值（OD663 OD645 OD630）分別減去在750nm下的光密度值（OD750）,，此值為非選擇性本底物光吸收校正值。葉綠素a濃度計算公式如下：  

（1）樣品提取液中的葉綠素a濃度Ca為：  Ca(微克/升)＝11.64（OD663－OD750）－2.16（OD645－OD750）+0.1（OD630－OD750  

（1） 水樣中葉綠素a濃度為： 葉綠素a(微克/升)＝Ca×v/(V×L) 

（2） 葉綠素a(微克/升)＝Ca×v/V×L

Ca：樣品提取液中葉綠素a濃度(微克/升) 

v ：90％丙酮提取液體積(ml) 

V：過濾水樣的體積（L） 

L：比色杯寬度（cm）

    這是傳統的化學方法檢測葉綠素a，現在還有一些簡便的儀器方法檢測，如美國安諾實驗室的ChloroTech121系列手持式葉綠素測定儀檢出限也很低，可達到ppb級。雙通道同時測定葉綠素a和濁度，使濁度數據對葉綠素a數據起一個修正功能。

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