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標記羊抗兔IgG保存策略

瀏覽次數:2120 發布日期:2014-4-17  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負

       辣根過氧化物酶(HRP)標記羊抗兔IgG應用:WB(1:1000 - 1:50000)、ELISA(1:500 - 1:10000) IHC(1:50 - 1:500)。 由于具體實驗中檢測方法的靈敏度,溫度及孵育時間等因素均可影響抗體最適工作濃度,所以實驗人員進行特定實驗時,需根據具體情況優化最適使用濃度。 反應性:該山羊抗兔二抗與兔IgG分子有特異性反應,與其它兔免疫球蛋白(包括IgM、IgE、IgD、IgA等)的輕鏈有交叉反應。該二抗與血清內非免疫球蛋白無交叉反應,但可能與其它種屬的免疫球蛋白有交叉反應。

    辣根過氧化物酶(HRP)標記羊抗兔IgG hrp過量導致wb實驗過程中的ecl猝滅現象的原理:淬滅是由于顯色反應中的hrp酶量過多造成的,推薦的改進方法是,減少hrp的量,包括,減少蛋白的上樣量,降低一抗濃度,降低二抗濃度這三個方法,總之就是減少hrp在膜上的結合量。可能有的人會問,我大量的抗體或者蛋白上樣量都做不出來,減少反而能做出來,這怎么可能呢?呵呵,其實我們首先要弄清楚,在顯色反應中誰是過量的問題,當然是底物,因為,亮度與hrp的量相關,hrp與目的蛋白的量相關,只有底物過量hrp的量才能清楚的反應目的蛋白的量(這里就不考慮定性實驗了)。因此,hrp相對于底物必須是不足量的。其次,應該有很多朋友都遇到過這樣一個現象:就是曝光時,條帶特別亮,可是壓上一兩次片子,條帶就滅了,但是如果把這張膜再用TBST洗過夜,再去曝光,熒光反而能持續更長的時間,這就是由于洗滌,使原先一些結合不牢的二抗掉了下來,曝光時,hrp的量降低了,不會較快的消耗底物,所以,發光的時間就變長了。

    最后對標記羊抗兔IgG該如何保存呢?專家建議:保存在-20°C.保質期為收到貨物后至少1年,合適的保存方式可以延長保質期。推薦閱讀》》TRITC標記二抗供應 http:///cpdg/2014/0417/701.html


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