目的：建立黃曲霉毒素M1檢測標準操作程序，并按規(guī)程進行檢測，保證檢測操作規(guī)范化。

范圍：適用于所有用黃曲霉毒素測定的供試品。

責任：檢驗員、實驗室負責人、實驗室經(jīng)理對本規(guī)程負責。

正文：

HPLC條件：

樣品取樣:真菌毒素分析的最大誤差來源是樣品的收集和取樣過程，所以必需保證樣品收集和取樣具有代表性。

樣品前處理：不同樣品前處理有些不太相同，具體如下：

①　牛奶：水浴加熱至40 oC；7000r離心15min，用上清液過柱凈化；

②　乳粉和粉狀嬰幼兒配方食品：稱取適量奶粉樣品，用蒸餾水將其溶解，混合均勻使其充分溶解后，7000r離心15min，用上清液過柱凈化；

③　發(fā)酵乳(包括固體狀、半固體狀和帶果肉型)：稱取適量奶粉樣品，溶于蒸餾水中，混合均勻使其充分溶解，調(diào)節(jié) PH值至微堿性，高速均質(zhì)器勻漿，水浴加熱后，離心，取上清液過柱凈化；

④　干酪：稱取適量切細或粉碎，過篩后加純水溶解，高速均質(zhì)器勻漿，超聲提取后收集上清液，然后用石油醚進行兩次萃取，然后用適宜的有機溶液萃取，取若干上清液過柱凈化；

⑤　奶粉：用蒸餾水溶解，混合均勻使其充分溶解，調(diào)節(jié)PH值至微堿性，水浴加熱后，離心，取上清液過柱凈化；

⑥　奶油：稱取適量加甲醇水溶解，震蕩后使用分液漏斗取下層溶液，蒸干后復溶于水，用于過柱凈化。

免疫柱凈化步驟：

┅┅取出免疫親和層析柱, 恢復至室溫，將上方塞子取出斜剪斷，再插回親和柱上。

┅┅將免疫親和柱連接于玻璃注射器下。準確移取清澈液注入玻璃注射器；

┅┅將空氣壓力泵與玻璃注射器連接，調(diào)節(jié)壓力使溶液以約1-2mL/min流速緩慢通過免疫親和柱，直至2~3mL空氣通過柱體；

┅┅更換玻璃注射器與親和柱連接，在注射器中加入10ml水，調(diào)節(jié)壓力使水以約6mL/min流速清洗親和柱。

┅┅準確加入4mL色譜級乙腈洗脫，流速為1 mL/min ~2mL/min，收集全部洗脫液于玻璃試管中，供檢測。

注：洗脫后的待測樣品最好用和緩的氮氣在30 ℃下將洗脫液蒸發(fā)至體積為50～500 μL；收集管中的洗脫液即為純化后的樣品，可直接用ELISA,熒光和高效液相等方法檢測。

HPLC 檢測需要儀器與耗材

以上方案由北京安美生醫(yī)藥科技有限公司檢測應用實驗室編制，最終解釋權歸安美生醫(yī)藥科技有限公司所有。

技術咨詢請聯(lián)系北京安美生醫(yī)藥科技有限公司技術部。

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進口專用，用于過濾大分子干擾物質(zhì)。

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氮吹儀

氮氣吹干，用于樣品濃縮

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不銹鋼均質(zhì)器

0-22000r/min

進口

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