ACQUITY UPLC®-Xevo TQ-S 同時測定豬尿液中的 21 種 β- 受體激動劑
王少珍 沃特世科技（上海）有限公司

今年 3 月，瘦肉精事件引發全國拉網式排查，瘦肉精事件鬧得沸沸揚揚， 10 年間瘦肉精屢禁不絕，添加瘦肉精喂出來的豬不僅顏色光亮，而且可以增加豬的瘦肉率，現在人們都關注身材，不吃肥膩的肉，這也導致飲食習慣吃瘦肉，而添加瘦肉精的豬肉正好符合當今人們的飲食習慣，瘦肉精事件一出大家都在徘徊這肉還吃不吃？

簡介
瘦肉精：一類動物用藥的統稱，任何能夠促進瘦肉生長、抑制動物脂肪生長的物質都可以叫做 “ 瘦肉精 ” 。 目前，能夠實現這種功能的物質是一類叫做 β- 興奮劑的藥物。與傳統瘦肉精鹽酸克倫特羅同屬 “ 腎上腺受體激動劑 ” 的萊克多巴胺等同類藥物同樣也能提高豬的瘦肉率。鹽酸克倫特羅的檢測方法主要有酶聯免疫吸附法（ ELISA ）、膠體金免疫層析法、高效液相色譜法、氣質聯用法及液質聯用法。國家標準 GB/T 5009.192-2003 動物性食品中克倫特羅殘留量的測定中規定方法為氣相色譜 - 質譜法（ GC-MS ）、高效液相色譜法、酶聯免疫法，其方法檢出限均為 0.5ug/kg 。 SN/T 1924—2007 進出口動物源食品中克倫特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇、特布他林殘留量的檢測方法采用 LC/MS/MS 法，該方法具有高靈敏度等優點被普遍使用。本文使用 UPLC/XEVO TQ-S 對豬尿液中的 β- 受體激動劑進行分析。

實驗方法
UPLC 條件
LC 系統： ACQUITY UPLC®
運行時間： 10min
色譜柱： ACQUITY® BEH C18 1.7μm ， 2.1mm x 100mm
流動相 A ： 0.1% 甲酸水
流動相 B ： 乙腈
流速： 0.40mL/min 


MS 條件
MS 系統： Xevo TQ-S
離子模式： ESI+
毛細管電壓： 3.5kv
源溫度： 150 ℃
霧 化氣溫度： 500 ℃
霧化氣流速： 900L/hr
錐孔氣流速： 20 L/hr

MRM 條件： Quanpedia 數據庫
Quanpedia 是沃特世特有的一種可擴展和可搜索的數據庫，為您提供 LC/MS/MS 定量方法信息，目前數據庫已有超過 1200 種化合物，包括色譜方法、質譜方法、定量方法等，您可自由選擇其中的任意化合物或化合物種類自動形成您所需的方法，無需再重新進行方法開發過程。

下圖為數據庫得到的方法信息：

自動生成 MRM 方法：

樣品制備
樣品制備參照 GB/T 22286-2008 《動源性食品中多種 β- 受體激動劑殘留量的測定》進行。
■ 量取 2.0mL 豬尿液 樣 品，加入 8mL 0.2M 的 PH 為 5.2 的乙酸鈉緩沖液，充分混勻
■ 加入 50μLβ-Glucuronidase/aryl sulfatase 混勻，于 37 ℃ 水浴水解過夜
■ 水解液振蕩 15min ，在 5000r/min 條件下離心分離 10min 后，取 4mL 上清液中添加 100uL 10ng/mL 的內標溶液混勻，加入 5mL 0.1M 高氯酸混合均勻，并調節溶液 PH 值到 1±0.3 。以 5000r/mim 條件下離心分離 10min 后，移取上清液并用 10M 的氫氧化鈉溶液調節 PH 值到 11 。
■ 加入 10mL 飽和氯化鈉溶液和 10mL 異丙醇 - 乙酸乙酯（ 6:4 ）混合溶液，離心分離后取有機相，在 40 ℃ 水浴下用氮氣將其吹干
■ 提取殘渣中加入 5mL 0.2M 乙酸鈉緩沖液（ PH5.2 ），超聲混勻溶解殘渣
■ 樣 品 凈 化（如下 圖 所示），使用 Oasis MCX （ 3cc/60mg ）小柱
■ 凈 化后的洗脫液用氮氣吹干，用流 動 相溶解定容至 1.0mL ，過 0.22μm 濾膜，待進樣分析

下圖為數據庫得到的方法信息：
固相提取凈化過程 Oasis MCX （ 3cc/60mg ）：

實驗結果與討論
本方法才用一次進樣同時監測豬尿液樣品中的 21 種 β- 受體激動劑進行檢測，在靈敏度、分離度方面獲得滿意的結果。與常規的串聯四極桿質譜儀不同的是， Xevo TQ-S 為您提供最好的定量數據的同時，還為您提供高質量的光 MS/MS 信息。對豬尿液中含 0.5ug/L 的受體激動劑樣品，啟用 PICs （子離子確認掃描）功能，可在不影響 MRM 定量的同時得到各化合物子離子掃描圖，與標樣子離子圖進行匹配，對樣品中陽性結果定性起到幫助判斷的作用。

 

結論
本方法采用多離子反應監測（ MRM ）方式對 21 種 β- 受體激動劑進行檢測，具有快速、準確、靈敏度高、分析周期短、適用范圍廣等優點。適用各類動物組織或動源性食品等的測定。

IntelliStart 技術可以使得開發分析方法過程變成流線型工作流程。這意味著需要更少的時間來開發方法，大大提高工作效率。強大的 Quanpedia 數據庫包含上千種化合物的方法，自動生成方法文件讓你輕松簡單快速應對各種突發事件。

PICs （子離子確認掃描）功能為您提供最好的定量數據的同時，還為您提供高質量的光譜 MS/MS 信息，對樣品中陽性結果定性起到幫助判斷的作用。

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