實驗材料:
1. 新生大鼠或小鼠;
2. 不含Ca2+和Mg2+的1×PBS,添加200000IU/L青霉素、200mg/L鏈霉素,pH7.2;
3. 培養用液:含10%的胎牛血清的MEM培養液,補加5μg/ml牛胰島素、2%葡萄糖及抗生素;
4. CFS-Ⅰ刺激因子:小膠質細胞在體外培養條件下一般不分裂,加入星形膠質細胞所產生的活性物質或單核巨噬細胞系體外存活、增值和分化特異的某些生長因子如CFS后可在體外增值;
5. 培養器具:眼科剪、眼科鑷等;
實驗方法:
1. 切取新生大鼠大腦皮質等灰質組織,經剪碎、胰蛋白酶消化,制成分離的細胞懸液,培養瓶中進行原代培養兩周左右。制備混合的膠質細胞原代培養物;
2. 37℃恒溫搖床上以150r/min搖動處理膠質細胞原代培養物2h;
3. 收集培養瓶中搖晃下來的細胞懸液,將其種植到未用生長基質成分包被的塑料培養皿內進行短期培養;
4. 棄去未貼壁的漂浮細胞及懸液。已在培養皿上貼壁的細胞即為小膠質細胞;
5. 將所獲得的小膠質細胞調制成細胞密度為2×105個/ml的細胞懸液;
6. 將細胞懸液種植到培養瓶、皿內,繼續培養。屆時在培養液中加入10%粗制CFS或者25U/ml的純CFS。一周換液兩次;