在復合物體系中連接更多的PAP復合物，來進一步放大抗原，從而使靈敏度更為增強，適用于檢測微量抗原。

實驗方法：
1. 將固定后的標本用PBS漂洗；
2. 于室溫下用1%H2O2或1%H2O2甲醇浸泡涂片10~20min，用來密封內源性過氧化物酶；
3. PBS漂洗2次，每次3min；
4. 在室溫下用二抗的正常血清孵育20min；
5. 滴加一抗后在室溫下放置1h或4℃冰箱內過夜；
6. PBS漂洗3次，每次3min；
7. 滴加二抗后于室溫放置30min；
8. 重復步驟6；
9. 加PAP復合物，室溫60min；
10. 重復步驟6；
11. 第二次滴加酶標二抗；
12. 用PBS液反復漂洗；
13. 第二次加PAP復合物；
14. 重復步驟12；
15. 將標本置于0.04%DAB+0.03%H2O2的溶液中顯色5~10min；
16. 用蘇木精復染后封片，鏡檢；