氯霉素殘留及檢測
瀏覽次數:3453 發布日期:2009-3-16
來源:河南知微生物工程有限公司
氯霉素最初是從委內瑞拉鏈絲菌的培養液中提取制得,現在用化學合成法大量生產。是一類廣譜抗生素。對革蘭氏陽性、革蘭氏陰性細菌均有抑制作用。其中對傷寒桿菌、流感桿菌和百日咳桿菌物作用比其它抗生素強,對立克次體感染如斑疹傷寒也有效,但是對革蘭氏陽性球菌的作用不及青霉素和四環素。
1、理化特性:性質穩定,在干燥狀態下可保存藥效達2年以上,易溶于有機溶劑,25℃時100ml水中僅溶解25mg。水溶液呈中性,在酸性和中性溶液中較穩定,遇堿類易分解失效。其合成品具有左旋光性,也稱左霉素 ( Laevomycetin )。
2、化學結構:氯霉素是一類1-苯基-2氨基-1丙醇的二乙酰胺衍生物。這類獨特的抗生素通常由以下三種化合物組成:氯霉素(CAP),甲砜(氯)霉素(THA),氟甲砜(氯)霉素(FLR)。上述三種抗生素都具有共同的主鏈架,其結構如圖所示,它們均被稱為:“苯醇類”。
化合物名稱 |
R1 |
R2 |
R3 |
CAP |
NO |
OH |
COCHCl2 |
THA |
CH3SO2 |
OH |
COCHCl2 |
FLR |
CH3SO2 |
F |
COCHCl2 |
《多個取代基的1-苯基-2氨基-1丙醇主鏈》
3、抑菌機理:氯霉素屬抑菌劑,高濃度時或作用于對本品成高度敏感的細菌時呈殺菌作用,為脂溶性,通過彌散進入細菌細胞內,并可逆的結合在細菌核糖體的50S亞基上,使肽鏈增長受阻,因此抑制了肽鏈的形成,從而阻止蛋白質的合成。
二、氯霉素殘留現狀及影響
2002年的上半年,圍繞著動物源性食品中國與歐盟之間引發了一系列貿易紛爭。2002年1月28日,歐盟以氯霉素殘留為由宣布全面禁止從中國進口動物源性食品。此項“禁令”封殺了中國每年約7億美元的相關產品出口。中國方面迅速就此作出回應。外經貿部新聞發言人高燕發表談話時稱中方對此事給予嚴重關注。并指出,歐盟僅憑沒有征求中方意見的考察報告,單方面作出決定,是不公正、不合理的。歐盟是我國蜂蜜傳統出口市場,年進口蜂蜜15萬噸,其中,自我國進口3-4萬噸,占其進口蜂蜜總量的27%左右,據我國海關統計,2001年我對歐盟出口蜂蜜4.3萬噸,占全球出口總量的41%。2月7日,英國以氯霉素超標為由停止銷售中國蜂蜜, 2月中下旬,英國食品標準局在市場上抽樣檢測中查出我國蜂蜜含歐盟禁用藥物——氯霉素殘留,發生了上市中國蜂蜜被召回的惡性事件。并影響到了中國蜂蜜對日本、加拿大等國的出口。中國國家質檢總局專門就氯霉素音量先后下發了兩個緊急通知(國質檢食函[2001]510號、國質檢食函[2001]578號),禁止在出口水產品的飼料、養殖(包括環境、器械等的消毒)、加工、保鮮、包裝和運輸等生產環節使用氯霉素,并要求各地檢驗檢疫機構加強對出口,限期整改,對如期驗收不合格的企業將取消其出口注冊資格,禁止其產品出口2002年8月21日農業部和國家質檢總局發出聯合通知,聲明將對中國水產品進行專項整治,以盡快削除藥物對中國水產品的危害。
三、危害及影響
1、 骨髓造血機能紊亂: 氯霉素對骨髓販造血機能有抑制作用,可引起血小板減少性紫殿、粒細胞缺乏癥、再生障礙性貧血、溶血性等,多數在長期或多次用藥的過程中發生。發生率約為1/100000-1/5000。骨髓的毒性分為兩類:一是可逆性抑制。主要影響紅細胞、血小板和白細胞的形成。二是再生障礙性貧血。前者與劑量有關,藥物的血濃度走過5ug/ml即可出現;后者少見,發生較晚而極為嚴重,與氯霉素的每日用量和總量均無直接關系。
2、 對早產兒和新生兒的毒性: 在早產兒和新生兒肝內有些酶系統發育尚不完全,葡萄糖醛酸結合的能力較差,因此影響氯霉素在肝中的解毒過程;此外,腎臟排泄能力亦較弱,能招致藥物蓄積中毒。
3、 胃腸道癥狀、口部癥狀:胃腸道反應主要有腹脹、腹瀉、食欲減退惡心、嘔吐則少見。口部癥狀如口腔粘膜充血、疼痛、糜爛、口角炎和舌炎等。
4、 其它不良反應: 可引起視神經炎、視力障礙、多發性神經炎、神經性耳聾以及嚴重失眠。有時發生中毒性精神病,主要表現為幻視、幻聽、定向力喪失、精神失常等。
四、部分國家檢驗檢疫要求:
● 1999年9月13日中華人民共和國農業部發布了《動物性食品中獸藥最高殘留限量》的通知,規定了氯霉素在所有食品動物的可食用組織中不得檢出。
● 中國農業部已將氯霉素從2000年版《中國獸藥典》中刪除列為禁藥。
● 2002年1月,美國食品與藥品管理局(FDA)公布了禁止在進口動物源性食品中使用氯霉素
● 歐盟的進口食品衛生標準規定“氯霉素含量標準為不得檢出。”其“不得檢出”的含義是氯霉素含量在1ppb以下,即含量在十億分之一經以下。
● 德國部分州的特殊檢測標準為0.2ppb。
● 我國方法檢測限量值:
牛奶 0.25ng/ml 肉類1.5ng/g 尿液1.0ng/ml
血清0.5ng/ml 蜂蜜 (快檢)1.5ng/g 蜂蜜 (18柱) 0.1ng/g
五、氯霉素殘留的檢測方法:
(一)液相色譜法:
以乙酸乙酯提取,取部分乙酸乙酯提取液,用氮氣吹去乙酸乙酯后,殘渣溶解于高氯酸中。用正已烷抽去脂肪,用配有紫外線檢測器的液相色譜儀測定,外標法定量。
(二)氣相色譜法:
組織經β-葡萄糖醛酸酶消化,經乙酸乙酯提取,然后將乙酸乙酯濃縮。加4%氯化鈉溶液,剩余的乙酸乙酯用氮氣吹干。將鹽溶液過C18萃取小柱,用20%甲醇洗滌,用甲醇洗脫。將洗脫液蒸發至干并固化,用配有電子捕獲檢測器的氣相色譜儀測定氯霉素。異氯霉素做內標物定量。本方法在牛肌肉組織的檢測限為1.0ng/g。
(三)酶聯免疫檢測法
目前國內檢測瘦肉精都是用ELISA法篩選,再用GS-MS或HPLC確證。ELISA測定法是酶標記的抗體或抗抗體來進行的抗原-抗體反應。由于酶的專一性催化作用,可使原來無色的底物通過水解,氧化或還原反應而顯示顏色,所以該法的優點是:1、可以通過顏色來快速做定性結果分析;2、特異性強;3、靈敏度高;4、酶標板上一次可作多份樣品檢測。
ELISA法原理是利用免疫學抗原抗體特異性結合和酶的高效催化作用,通過化學方法將植物辣根過氧化物酶(HRP)與氯霉素結合,形成酶偶聯氯霉素。將固相載體上已包被的抗體(羊抗兔lgG抗體)與特異性的抗克倫特羅抗體結合,然后加入待測氯霉素和酶偶聯氯霉素,它們競爭性與氯霉素抗體結合,洗滌后加底物,根據有色物的變化計量待測氯霉素的量。若待測氯霉素多,則被結合的酶偶聯氯霉素少,有色物量就少。用目測法或比色法測定樣品中的氯霉素含量,比色的最佳波長為450nm,參比波長應大于650nm 。