摘要：建立了γ-亞麻酸和二高γ-亞麻酸含量測定的氣相色譜面積歸一化方法。γ-亞麻酸和二高γ-亞麻酸在樣品處理和色譜條件上是完全一致的，僅是出峰時間上有差別，經精密度、重現(xiàn)性、回收率實驗，γ-亞麻酸RSD分別為1．51 、1、89％和0．98％，二高γ-亞麻酸RSD分別為1．45 、1．15％和0．81 。相關性分析r值均達到極顯著水平。用面積歸一化法進行γ-亞麻酸和二高γ-亞麻酸含量測定能夠達到簡便、準確、快速、誤差小的目的。
關鍵詞：γ-亞麻酸；二高γ-亞麻酸；氣相色譜法
中圖分類號：O 657．71 文獻標識碼：A 文章編號：1672—5425(2005)01一OO5O—O3

     合成前列腺素E (Prostaglamdi E )是以月見草油中分離得到的 亞麻酸為前體物質[1]。γ-亞麻酸經過還原反應、磺化反應、增碳反應、水解反應等步驟而合成二高 亞麻酸，然后通過生物合成前列腺素E 。
     高純度的γ-亞麻酸才能合成二高γ-亞麻酸，因此有必要建立一種快速、簡便測定γ-亞麻酸和二高γ-亞麻酸的方法為質量控制提供保證。目前國內測定γ-亞麻酸多是采用氣相色譜外標或內標法[2]，對于二高γ-亞麻酸的檢測有報道用紅外光譜法[1]，作者通過實驗確立了采用氣相色譜法的面積歸一化法來計算γ-亞麻酸和二高γ-亞麻酸的方法。

l 實驗
1．1 儀器與試劑：南京科捷分析儀器有限公司GC5890型氣相色譜儀（毛細管進樣系統(tǒng)，F(xiàn)ID） 水浴鍋；γ-亞麻酸標準品、二高γ-亞麻酸標準品，二高γ-亞麻酸樣品(自行合成)，γ-亞麻酸樣品(從月見草油中富集得到)，K0H，F(xiàn)B3-乙醚，石油醚，甲醇，均為分析純。

1．2 方法
1．2．1 色譜條件：色譜柱：毛細管柱(30m×0.25mm)，溫度：柱箱230℃，進樣口250℃，檢測器280℃ ；壓力：N₂ 0.5MPa，H₂ 35ml/min，Air400 ml/min
1．2．2 樣品及標準品的處理：取樣品或標準品4滴置于10mL具塞試管中，加入0．5 mol/L 的K0H甲醇溶液2 mL于63℃水浴中皂化20 min，加入BF3-乙醚溶液0．2 mL，63℃水浴中甲酯化5 min，取出冷水冷卻，加入2 mL石油醚，振搖，吸取上層2 L進樣，按面積歸一法計算。

2 結果與討論
2．1 不同批次γ-亞麻酸、二高γ-亞麻酸樣品和月見草油中γ-亞麻酸峰面積和含量的相關性實驗
2．1．1 不同批次月見草油γ-亞麻酸和三次包合后γ-亞麻酸峰面積和含量的相關性經相關分析知不同批次不同含量的月見草油中γ-亞麻酸的峰面積和含量(％)相關性達到了極顯著水平(r=0．992)，采用面積歸一化法進行γ-亞麻酸含量計算比較簡便、快速、誤差也小，原因是該色譜條件下月見草油中的5種脂肪酸完全能夠分開。對月見草油γ-亞麻酸經富集后純度達90 以上時，主要是γ-亞油酸和γ-亞麻酸(見圖lb)。對不同批次富集后的γ-亞麻酸的峰面積和含量(％)分析相關性也達到了極顯著水平(r=0．9997)。
2．1．2 不同批次二高γ-亞麻酸峰面積和含量的相關性分析
樣品二高γ-亞麻酸采用面積歸一化計算含量時，峰面積和含量的相關性達到了極顯著水平(r=O．9842)，由于二高γ-亞麻酸的合成是從高純度的γ-亞麻酸為起始物，因此也只有兩個峰，但出峰的時間上拖后(見圖1c)。
2．2 線性關系的考察：精密稱取γ-亞麻酸或二高γ-亞麻酸標準品20 mg置于1O mL容量瓶中，按1．2．2方法進行處理，精密吸取2 mL石油醚萃取的上清液1．0 L、1．5 L、2．0 L、2．5 L、3．0 L，按l-2．1的色譜條件進行色譜分析，結果見表3。
    表3說明在10～30 g范圍內γ-亞麻酸和二高γ-亞麻酸峰面積積分分值和含量成極顯著的相關性，其r值分別為0．995和0．9997 。
2．3 精密度和重現(xiàn)性考察：精密度考察；精密吸取標準品溶液(10μg/mL )1μL注入氣相色譜儀連續(xù)5針，記錄峰面積積分值。
    重現(xiàn)性考察：取自制的樣品1μL，重復5次取樣，記錄峰面積積分值。經分析γ-亞麻酸和二高γ-亞麻酸的精密度RSD分別為1．51 和1．45％，重現(xiàn)性RSD分別為1．89 和1．15 。
2．4 回收率的測定：精密稱取已知含量的樣品適量，精密加入一定量的標準品，按樣品處理操作，進樣2 μL，按相關性所得峰面積和含量的關系轉換成含量。結果見表4。
    表4結果說明γ-亞麻酸和二高γ-亞麻酸的平均回收率分別為98．92 和99．44 ，RSD 分別為0．98 和0．81 ，說明樣品處理是可靠的。

3 結論
(1)對不同批次不同含量的月見草油中γ-亞麻酸的峰面積和含量的相關性分析可以看出相關系數(shù)r=O．992，達到了極顯著水平，結合圖譜可知月見草油的脂肪酯主要是硬脂酸、軟脂酸、油酸、亞油酸和一γ-亞麻酸5種脂肪酸，在該色譜條件下，這5種脂肪酸的分離效果較好，因此可以采用面積歸一化法計算含量。經富集后即純度在9O 以上的γ-亞麻酸峰面積和含量的相關性分析知，r=0．9997，也達到了極顯著水平，富集后只剩下亞油酸和γ-亞麻酸兩種組分。
(2)對不同批次的二高γ-亞麻酸的峰面積和含量的相關分析r=0．9842達到了極顯著水平，在該色譜條件下也能夠采用面積歸一化法計算含量，但γ-亞麻酸和二高γ-亞麻酸的差別僅在于出峰時間上不一致。

 

注：（作者鄭基斌，電話13951984142，QQ：514456548）