ELISA 試劑的評價（evaluation ）分兩個方面：一是試劑本身的質量評價，符合一定要求后才能生產供應；一是在臨床應用中效果的評價。以肝炎ELISA 診斷試劑為例，首先必須通過中國藥品生物制品檢定，以得到生產的許可。檢定內容除包裝、標簽、說明書等外，對試劑的性能，如特異性、靈敏度、精密度和線性等均需逐項檢定，通過對一系列參比品的檢測，結果符合要求者才為合格。ELISA 試劑的臨床質量評價是用該試劑對臨床樣本進行檢測，以觀察其實際應用價值。部臨檢中心對乙肝ELISA 診斷試劑在這方面進行了工作，通過質量評價，促進了試劑質量的提高。

一、診斷試劑臨床質量評價要點
從臨床應用角度考核檢驗試劑的可靠性，是以其能否區分健康與疾病的能力作為依據的。目前還很難找到 100%可靠的試驗，任何試驗都會出現假陽性或假陰性。判斷試驗的可靠性常以其靈敏度及特異性作為考核標準。臨床應用的靈敏度用疾病患者試驗陽性的百分率表示，特異性以無病者試驗陰性的百分率表示。
進行這種評價，首先需要收集有關的病人血清，然后用公認的檢測該項標志物最可靠的試劑進行測定，以確定其為陽性或陰性。這一組表明測定物為陽性或陰性的血清組成"血清盤"（panel）。被評價的試劑測定此血清所得結果與血清盤標明的結果的關系如下表：
血清盤結果
合計

一般認為靈敏度或特異性>90%為良好。符合率是綜合靈敏度和特異性的指標。

二、 臨床考核血清盤的制備要求
1、采用人的原血清；
2、血清盤應具有相應的穩定性；
3、血清盤中樣本不含防腐劑，或只含極微量的、不影響檢驗結果的防腐劑；
4、血清盤所包含的陰性樣本和陽性樣本約各占一半；
5、陽性樣本中，應有一定數量的強陽性和弱陽性樣本；
6、血清盤中應有一定數量的臨界值上、下含量的樣品，以檢驗試劑的靈敏度。
7、血清盤中應包含與該項檢驗相關的病種樣本和已積知具有干擾物質（RF 因子）的樣本，以檢驗試劑的特異性。

6.3 臨床考核血清盤的建議
以抗 -HBc-IgM 為例，部臨檢中心收集近百例臨床肝炎病人的樣本，經美國abbott 公司抗-HBc-IgM 試劑反復檢驗篩選。選出血清70 份，其中陽性29 份，陰性41 份，組成抗-HBc-IgM 臨床考核血清盤。在70 份樣本中，除7 份為無病歷的質控血清外，抗-HBc-IgM 陽性的22 份樣本中含臨床診斷急性肝炎16 例、慢性活動性肝炎5 例、重癥肝炎1 例；抗-HBc-IgM 陰性的40 份樣本中，含臨床診斷慢性遷延性肝炎24 例、急性肝炎例（均為恢復期采的血樣）、慢性活動性肝炎8 例（其中5 例為恢復血樣）。
因此，這套抗血清盤用于商品試劑的臨床考核，可以將臨床上乙肝急性期、慢性活動期病人區分開，具有臨床診斷意義。



質量管理
ELISA 是一種敏感性高、特異性強、重復性好的實驗診斷方法，由于其試劑穩定、易保存、操作簡便、結果判斷較客觀等因素，以及既適宜于大規模篩查試驗又可以用于少量標本的檢測，既可以做定性試驗也可以做定量分析等優點，已廣泛應用于微生物學、寄生蟲學、腫瘤學和細胞因子等領域。ELISA 的影響因素較多，加強質量管理才能充分發揮其方法學的優點。

分析前質控
●人員培訓實驗是人操作的，因此檢驗人員需經過培訓，熟練掌握本專業如下幾方面的技術知識：
◎檢驗項目的基本原理（ELISA 原理）；
◎臨床意義；
◎熟悉檢測技巧，了解易出差錯的環節及難點；
◎熟悉檢測試劑性能（包括試劑盒組成，包被片段及其組成）；
◎ 熟悉檢測儀器的原理及性能；掌握數據處理的能力和質量控制知識。
◎某些特殊項目的檢測如抗HIV 等需經有關部門組織的專門培訓班，考試合格后持證上崗。
分析前質控
◎ELISA 原理：1971 年Engvall 等人把免疫組化的EIA 技術應用于臨床檢驗發展為ELISA 技術。
特點：在固相表面組裝免疫活性物質形成"免疫吸附劑"
酶標記免疫活性物質，進行信號放大；
有二步溫育反應二次洗滌過程；
靈敏度特異性相對較高。
局限性：只能檢測到ng 水平
精密度差（批內CV15-20%）；
線性范圍窄（一個數量級）；
存在"HD-HOOK" 效應。
ELISA 原理

●根據檢測目的和操作步驟不同有三種基本方法。
●雙抗體（原）夾心法檢測抗原（體）的常見方法，應用針對抗原兩個不同決定族的兩種單抗分別作為固相載體和酶標抗體檢測溶液中的抗原（適用于二價以上抗原,不能測小分子半抗原）。
●間接法檢測抗體的方法，利用酶標記的抗抗體（第二抗體）檢測已與固相抗原結合的抗體。
●競爭法檢測抗原或小分子半抗原、抗體，以測抗原為例，使待測抗原和酶標抗原競爭與固相抗體結合，結果如待測抗原含量越多，與固相抗體結合的酶標抗原就越少，顯色越淺，二者呈負相關。
ELISA 今后的發展方向

●聚苯乙烯表面的高級制備。已有的技術是酰肼化（聚二氟乙叉，PVDF）；生物素化；預包被多聚賴氨酸等，均是專利產品。
●酶促信號放大的改變，如酶促熒光、酶促化學發光等。
ELISA 臨床意義
●各型肝炎的特征及標志物
乙肝二對半的模式及臨床意義
HBsAg HBeAg HBcAb-IgG HBcAg-IgM HBeAb HBsAb &n bsp; 臨床意義
---- 急性HBV 感染早期HBV 復制活躍
-- 急慢性HBV 感染，HBV 復制活躍
- -- 急慢性HBV 感染，HBV 復制中躍
- - 急慢性HBV 感染，HBV 復制低躍
- - -HBV 復制停止或極低
-- -- 平靜的HBV 攜帶狀態，HbsAg
-- ---HBV 既往感染，未產生抗-HBs
-- -抗HBs 出現前期，HBV 復制低
-- - HBV 感染恢復期
-- -- HBV 感染恢復期
- 不同亞型ＨＢＶ再感染
-----ＨＢＶ－ＤＮＡ整合
-----＋ 病后或接種疫苗后獲得免疫



試劑盒選擇

◎衛生部規定乙肝試劑，丙肝試劑，艾滋病試劑，梅毒試劑及血型試劑必須使用經衛生部生物制品檢定所檢定合格，并貼有防偽標簽的產品，試劑應從靈敏度，特異性，精密度，穩定性，簡便性，安全性及經濟性作出全面的評價。
◎靈敏度：有二層含義，1）為試劑檢出被檢物質的最低量的能力；2）為試劑對人群或大量樣品中陽性檢出的能力（假陰性越少越好），取決于包被物的全面性。