久热久草在线_一一高清视频在线观看_在线观看91av_久草免费在线观看视频_国产精品午夜无码A体验区_国产一级高清

English | 中文版 | 手機(jī)版 企業(yè)登錄 | 個(gè)人登錄 | 郵件訂閱
當(dāng)前位置 > 首頁 > 技術(shù)文章 > 電泳技術(shù)概述

電泳技術(shù)概述

瀏覽次數(shù):3086 發(fā)布日期:2008-5-11  來源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)
電泳是指帶電顆粒在電場的作用下發(fā)生遷移的過程。許多重要的生物分子,如氨基酸、多肽、蛋白質(zhì)、核苷酸、核酸等都具有可電離基團(tuán),它們在某個(gè)特定的pH值下可以帶正電或負(fù)電,在電場的作用下,這些帶電分子會(huì)向著與其所帶電荷極性相反的電極方向移動(dòng)。電泳技術(shù)就是利用在電場的作用下,由于待分離樣品中各種分子帶電性質(zhì)以及分子本身大小、形狀等性質(zhì)的差異,使帶電分子產(chǎn)生不同的遷移速度,從而對樣品進(jìn)行分離、鑒定或提純的技術(shù)。
 
電泳過程必須在一種支持介質(zhì)中進(jìn)行。Tiselius等在1937年進(jìn)行的自由界面電泳沒有固定支持介質(zhì),所以擴(kuò)散和對流都比較強(qiáng),影響分離效果。于是出現(xiàn)了固定支持介質(zhì)的電泳,樣品在固定的介質(zhì)中進(jìn)行電泳過程,減少了擴(kuò)散和對流等干擾作用。最初的支持介質(zhì)是濾紙和醋酸纖維素膜,目前這些介質(zhì)在實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)應(yīng)用得較少。在很長一段時(shí)間里,小分子物質(zhì)如氨基酸、多肽、糖等通常用濾紙或纖維素、硅膠薄層平板為介質(zhì)的電泳進(jìn)行分離、分析,但目前則一般使用更靈敏的技術(shù)如HPLC等來進(jìn)行分析。這些介質(zhì)適合于分離小分子物質(zhì),操作簡單、方便。但對于復(fù)雜的生物大分子則分離效果較差。凝膠作為支持介質(zhì)的引入大大促進(jìn)了電泳技術(shù)的發(fā)展,使電泳技術(shù)成為分析蛋白質(zhì)、核酸等生物大分子的重要手段之一。最初使用的凝膠是淀粉凝膠,但目前使用得最多的是瓊脂糖凝膠和聚丙烯酰胺凝膠。蛋白質(zhì)電泳主要使用聚丙烯酰胺凝膠。
 
電泳裝置主要包括兩個(gè)部分:電源和電泳槽。電源提供直流電,在電泳槽中產(chǎn)生電場,驅(qū)動(dòng)帶電分子的遷移。電泳槽可以分為水平式和垂直式兩類。垂直板式電泳是較為常見的一種,常用于聚丙烯酰胺凝膠電泳中蛋白質(zhì)的分離。電泳槽中間是夾在一起的兩塊玻璃板,玻璃板兩邊由塑料條隔開,在玻璃平板中間制備電泳凝膠,凝膠的大小通常是12cm 14 cm,厚度為1mm~2? mm,近年來新研制的電泳槽,膠面更小、更薄,以節(jié)省試劑和縮短電泳時(shí)間。制膠時(shí)在凝膠溶液中放一個(gè)塑料梳子,在膠聚合后移去,形成上樣品的凹槽。水平式電泳,凝膠鋪在水平的玻璃或塑料板上,用一薄層濕濾紙連接凝膠和電泳緩沖液,或?qū)⒛z直接浸入緩沖液中。由于pH值的改變會(huì)引起帶電分子電荷的改變,進(jìn)而影響其電泳遷移的速度,所以電泳過程應(yīng)在適當(dāng)?shù)木彌_液中進(jìn)行的,緩沖液可以保持待分離物的帶電性質(zhì)的穩(wěn)定。
 
為了更好的了解帶電分子在電泳過程中是如何被分離的,下面簡單介紹一下電泳的基本原理。在兩個(gè)平行電極上加一定的電壓(V),就會(huì)在電極中間產(chǎn)生電場強(qiáng)度(E),L是電極間距離。
 
在稀溶液中,電場對帶電分子的作用力(F),等于所帶凈電荷與電場強(qiáng)度的乘積。這個(gè)作用力使得帶電分子向其電荷相反的電極方向移動(dòng)。在移動(dòng)過程中,分子會(huì)受到介質(zhì)粘滯力的阻礙。粘滯力(F’)的大小與分子大小、形狀、電泳介質(zhì)孔徑大小以及緩沖液粘度等有關(guān),并與帶電分子的移動(dòng)速度成正比,對于球狀分子,F(xiàn)’的大小服從Stokes定律,即:F’=6πrηυ式中r是球狀分子的半徑,η是緩沖液粘度,υ是電泳速度(υ= d / t,單位時(shí)間粒子運(yùn)動(dòng)的距離,cm / s )。當(dāng)帶電分子勻速移動(dòng)時(shí): F = F’,q?E = 6πrηυ由此可以看出,遷移率與帶電分子所帶凈電荷成正比,與分子的大小和緩沖液的粘度成反比。

用SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳測定蛋白質(zhì)分子量時(shí),實(shí)際使用的是相對遷移率mR。帶電分子由于各自的電荷和形狀大小不同,因而在電泳過程中具有不同的遷移速度,形成了依次排列的不同區(qū)帶而被分開。即使兩個(gè)分子具有相似的電荷,如果它們的分子大小不同,由于它們所受的阻力不同,因此遷移速度也不同,在電泳過程中就可以被分離。有些類型的電泳幾乎完全依賴于分子所帶的電荷不同進(jìn)行分離,如等電聚焦電泳;而有些類型的電泳則主要依靠分子大小的不同即電泳過程中產(chǎn)生的阻力不同而得到分離,如SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳。分離后的樣品通過各種方法的染色,或者如果樣品有放射性標(biāo)記,則可以通過放射性自顯影等方法進(jìn)行檢測。

用戶名: 密碼: 匿名 快速注冊 忘記密碼
評論只代表網(wǎng)友觀點(diǎn),不代表本站觀點(diǎn)。 請輸入驗(yàn)證碼: 8795
Copyright(C) 1998-2025 生物器材網(wǎng) 電話:021-64166852;13621656896 E-mail:info@bio-equip.com
主站蜘蛛池模板: 国产一级无码片在线观看免费 | 91精品国产综合久久久久久软件 | 久久中文视频 | 999国产在线观看 | 久久久久欠精品国产毛片国产毛生 | 国产精品久久久久久久白浊 | 亚洲AⅤ片不卡无码久久 | 黄色在线免费观看视频网站 | 国外欧美一区另类中文字幕 | 成年女人毛片免费中文 | 日韩一区二区中文字幕 | 亚洲国产成人久久久 | 乱子伦xxxx无码 | 激情四射五月天婷婷 | 国产在线观看片免费人成视频 | 日韩中文字幕视频在线 | 国产精品区一区二区三区 | 亚洲色大成网站www久久九 | 午夜亚洲国产理论片无码片 | 精品一区二区久久久久久按摩 | 亚洲风情在线观看 | 国内久久精品视频 | 久久久久9999国产精品 | 欧美亚洲国产精品 | aaa一区| www.色成人100 | 国产乱对白刺激视频在线观看 | 国产欧美日韩综合精品久久一区 | 亚洲第一区在线观看 | 欧美77| 伊人黄网 | av毛片无码中文字幕不卡 | 国产欧美呀洲一区二区 | 成人精品视频99在线观看免费 | 国产成人精品a视频一区 | 亚州精品天堂中文字幕 | 二级大黄大片在线播放 | 天天躁日日躁成人字幕aⅴ 久久精品国产网站高清综合 | 黄视频网站在线看 | 国产精品99久久久久人最新消息 | 中文字幕第一区第二区 |