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圖像采集與分析技術及凝膠成像分析系統操作方法

瀏覽次數:4956 發布日期:2008-5-10  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負
一、儀器設備
凝膠成像分析系統 ChemiGenius2
二、儀器結構
見下圖

三、原  理
樣品在電泳凝膠或者其他載體上的遷移率不一樣,以標準品或者其他的替代標準品相比較就會對未知樣品作一個定性分析。這個就是圖像分析系統定性的基礎。根據未知樣品在圖譜中的位置可以對其作定性分析,就可以確定它的成份和性質。
樣品對投射或者反射光有部分的吸收,從而照相所得到的圖像上面的樣品條帶的光密度就會有差異。光密度于樣品的濃度或者質量成線性關系。根據未知樣品的光密度,通過于已知濃度的樣品條帶的光密度指相比較就可以得到未知樣品的濃度或者質量。這就是圖像分析系統定量的基礎。
采用最新技術的紫外透射光源和白光透射光源使光的分布更加均勻,最大限度的消除了光密度不均造成的對結果的影響。

四、適用范圍
1.蛋白質、核酸、多肽、氨基酸、多聚氨基酸等其他生物分子的分離純化結果作定性分析。
2.可以確定生物分子的分子量。
3.可以應用于生物分子的定量分析中。

五、操作步驟
1.打開凝膠成像系統開關。
2.打開電腦,系統自動打開并進入GeneSnap軟件。
3.打開凝膠成像系統前面板,選擇使用紫外透射光源或者白光透射光源,將相應光源安放到位。
4.將樣品放置在透射光源的樣品臺上。
5.在GeneSnap操作界面里面選擇使用Upper white光源,點擊綠色(即時成像)按鈕。

6.根據右側成像窗口中顯示的即時照片,手動調節凝膠在樣品臺上的位置,直至成像窗口中凝膠在照片的中央位置,關上凝膠成像系統的前面板。
7.選擇紫外光源:
No Light 不使用燈照射,直接成像
Transilluminator 紫外透射光源
Epi long wave uv 長波紫外反射光源(365nm)
Epi long wave uv 短波紫外反射光源(254nm)
Upper white 頂部白色反射光源
Lower white 底部白色透射光源
8.E.D.R.及N.F.的選擇: E.D.R. 動態范圍擴展,可以使照片由
12 位變為16位,更加清晰
N.F. 中間部分區域校正,可以消除背景光
分布不均造成的影響
9.選擇照相時所使用的靈敏度:
High resolution 高分辨率
Medium sensitivity 中靈敏度
High sensitivity 高靈敏度
Max sensitivity 最高靈敏度
10. 選擇使用的濾光片: No Filter 適用于可見光、熒光
和化學發光物質的照相
EtBr/UV 適用于紫外光照相
11. 點擊綠色(即時成像)按鈕,按鈕變為紅色,成像窗口出現即時照片。
12.調整照相機光圈大小,使看到的凝膠照片亮度正合適。
13.調整圖片放大/縮小倍數,使所照凝膠所成的照片大小與成像窗口大小相適應。
14.調整照相機的焦距,使凝膠所成的照片最清晰。
15.設置曝光時間,使所成的照片清晰、亮度適中。
16.點擊紅色按鈕,凍結圖像并且在成像窗口中顯示(freeze image as current view in image window)。
17.調整預覽照片的亮度(Reset brightness),使照片明亮清楚。
18.調整預覽照片的對比度(Reset contrast),使照片上的圖案更加。
19.調整預覽照片的灰度(Reset gamma),使照片更加清晰。
20.把各個參數都調節到最佳之后,保存照片。 Toggle false color view Show saturation

六、注意事項
1.紫外凝膠照相時要防止EB污染儀器,在紫外透射燈樣品臺上墊上藍色和白色膠片,開關凝膠成像系統前面板那、操作GeneSnap軟件之時都不可以戴手套。白光透射光源放置在紫外透射光源上面時要把藍色和白色膠片取出。

2.注意開機順序,先開凝膠成像系統,再打開電腦進入GeneSnap軟件。
3.在使用紫外光源照相的過程中,不可以打開凝膠成像系統前面板。

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