一、儀器設備

721、723可見分光光度計、752紫外可見分光光度計、UV－2401PC紫外可見分光光度計、UV－3150PC紫外可見近紅外分光光度計、RF-5301PC熒光分光光度計、比色液及標準溶液、濾紙等。

二、儀器結構



三、原　　理
光譜儀器是一種簡單易用的分光光度法測定通用儀器，不同型號的機器測定的波長范圍不同，可以根據自己的需要選擇要使用的儀器。
不同型號的光譜儀器的構造有很大的差別，但是其基本原理是相同的。根據溶液中各種成分對透過光的吸光度不同，在一定范圍內，吸光值（或者透過率）與溶質的濃度成正比（玻爾定律）。通過準確濃度的標準品對應其吸光值（透過率）作圖，我們就可以得到一條標準曲線。測定未知濃度的待測樣品的吸光值（透過率），與標準曲線相比較就可以得到其濃度。

四、適用范圍
可廣泛用于醫學衛生、臨床檢測、生物化學、石油化工、環保檢測、質量控制等方面作定量、定性分析。
具體到我們實驗室，可以對多糖、蛋白、核酸等物質進行定性、定量測量。同時UV－3150PC紫外可見近紅外分光光度計還可以測量近紅外區的固體、液體樣品的吸收光譜，RF-5301PC熒光分光光度計可以測定熒光物質的發光強度光譜，同時他們自帶的軟件可以方便的進行數據處理與分析。

五、操作步驟
我們以UV－3150PC紫外可見近紅外分光光度計為例講述光譜儀器的性能和操作方法。
1、插上電源，打開光度計前面的電源開關。
2、雙擊計算機桌面UVProbe圖標，打開UVProbe軟件，點擊UVProbe中“Connect”圖標聯機，出現自檢畫面。
3、如自檢完全部綠燈亮，則點擊“OK”進入系統。若出現紅燈亮，可關掉光度計重新連接，若仍未通過自檢，應立即報告儀器負責老師。
4、完全通過并進入系統，出現UVProbe菜單欄和工具欄。UVProbe有四大主要模塊，包括光譜掃描模塊、光度測量模塊、時間掃描模塊和報告生成器。每種模式都可以直接點擊后面的方法設定按鈕設置方法。

5、點下光譜掃描圖標，出現光譜掃描界面。
6、點擊方法按鈕，出現方法設置對話框。在此可以設置掃描波長范圍，儀器的最大范圍為3200～190nm。可以設置掃描速度，一般可選中速（Medium）或快速（Fast）進行掃描。采樣間隔表示光度計每隔多少nm讀一個吸光度值，如沒有特殊要求，選擇自動即可。可選擇是否重復掃描曲線，若重復則設置重復次數和間隔時間。

7、點擊“Sample Preparation”輸入樣品信息。包括樣品的質量、體積、稀釋倍數和測量光程等。也可以輸入樣品的其他信息。
8、點擊“Instrument Parameters（儀器參數）”設置測量方式和儀器的一些參數。在測量模式中可選擇“Transmittance（透過率）”、“Absorbance（吸光度）”、“Energy（能量）”和“Reflectance（反射）”，其中Reflectance一般用積分球測定固體樣品時使用。狹縫設置在3200～800nm下設為5nm，在800～190nm設為2nm。若包括這兩個范圍的波長如1500～500nm則選擇狹縫為5nm。

9、換燈和檢測器可根據所測樣品進行設置，換燈在393～282nm范圍內任意值均可，換檢測器在895～750nm范圍內任設一個值即可。但換燈和檢測器由于儀器進行機械的移動，會造成信號波動較大，稱儀器噪音大，此時所得掃描曲線誤差較大，所以所設波長應該避免在樣品吸收峰位置以免影響測定值。

10、所有參數設置完成后，兩個樣品架均不放置樣品或兩個均放上同樣的空白溶液，點擊“Baseline”，開始進行基線校正，儀器掃描完成后，點擊“λGoToWL”將波長轉到750nm，點擊“Auto Zero”把750nm的波長設為0。點擊“Start”再次掃描，若得出曲線最值均小于0.001，則認為基線平坦，若數值較大，則將750nm吸光度設為0重新進行基線掃描。

11、基線校正完成后，取出樣品架的空白溶液，放入樣品溶液，點擊“Start”開始掃描曲線。掃描完成后，出現保存路徑框和文件名框，設置好后出現掃描曲線。
12、曲線掃描完成后，在譜圖上點擊鼠標右鍵，出現快捷菜單。點擊“AutoScale”可是軟件自動調節圖像坐標使之適合掃描所得數據。點擊“Cross Hair>Display”鼠標顯示為交叉線，用鼠標將交叉線放到曲線上某點即可顯示該點的波長和吸光度值。
13、點擊“Label”可以在譜圖上添加標簽，可在其中輸入文本以標記譜圖。點擊“Legend”出現各數據保存圖，若在前面框里勾選該光譜數據，則在左面重疊圖上顯示其曲線。

14、若從右鍵快捷菜單中選擇“Customize（自定義）”，可以自定義曲線顯示顏色還可定義坐標軸的數值。
15、得出曲線后可以對譜圖進行一系列的處理。
（1）點擊“DataPrint（顯示數據）”圖標可以將譜圖曲線直接顯示為數值。
（2）點擊“Manipulate（運算）”圖標，可以進行加減乘除、差譜、扣除空白、倒數光譜、對數光譜等處理。
（3）點擊“PeakPoint（顯示峰值）”按鈕顯示“波峰”和“波谷”的數值。
（4）點擊“PointPick”圖標，輸入要顯示的波長值，立即顯示出所輸入波長處的吸光度值。
（5）點擊“PeakArea”，設定峰閾值，即顯示大于此閾值的峰區域。
（6）點擊“Sewingbox（裁縫）”圖標，可以進行譜圖的裁剪和縫合。
16、光譜曲線掃描完成后數據實際直接保存在內存中，并沒有保存到硬盤上，此時若關閉窗口，電腦會提示“Some Spectrum data has not been saved!Do you still want to exit and lostunsaved change？（還有光譜數據尚未保存，你是要離開而不保存數據嗎？）”選擇“No”返回主界面保存所有數據。

六、注意事項
1、光度計燈源壽命有限，若長時間不測量，應通過UVProbe軟件斷開連接（點擊“Disconnect”），然后關閉光度計電源。
2、使用分光光度計時要保證樣品室絕對干凈，小心放入樣品，放入比色皿前一定要先用濾紙和擦鏡紙將比色皿外表面擦干凈，不要污染樣品池和光度計外表面。
3、儀器自檢和掃描的過程中，不要打開樣品室蓋。
4、軟件不會自動保存數據，所有的數據要保存都必須點擊“Save”或者“SaveAs”進行另存。否則數據會丟失。
5、認真填寫貴重儀器使用記錄。